小鼠轉化生長因子β1（tgf-β1）elisa檢測試劑盒操作注意事項
樣品收集、處理及保存方法
1.血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.血漿：edta、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3.細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5.保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.酶標儀（450nm）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
3.37℃恒溫箱
操作注意事項
1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶溶解后再使用。
2.實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.預處理后的樣本無需稀釋，直接取10μl加樣即可。
4.嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5.所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標板
12孔×8條
12孔×4條
無
標準品
0.3ml
0.3ml
無
樣本稀釋液
6ml
3ml
無
檢測抗體-hrp
10ml
5ml
無
20×洗滌緩沖液
25ml
15ml
按說明書進行稀釋
底物a
6ml
3ml
無
底物b
6ml
3ml
無
終止液
6ml
3ml
無
封板膜
2張
2張
無
說明書
1份
1份
無
自封袋
1個
1個
無
注：標準品濃度依次為：160、80、40、20、10、0 ng/ml.
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1.手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2.自動洗板機：每孔注入洗液350μl，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μl；
3.待測樣本孔先加待測樣本10μl，再加樣本稀釋液40μl；
4.隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（hrp）標記的檢測抗體100μl，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物a、b各50μl，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μl，15min內，在450nm波長處測定各孔的od值。
小鼠轉化生長因子β1（tgf-β1）elisa檢測試劑盒操作注意事項
關鍵詞：酶標儀 恒溫箱 洗板機 水浴鍋

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