1.多肽文庫篩選概念
多肽文庫是指大量特定長度且序列不同的小肽的集合,它包括了該長度短肽中各種(或絕大部分)氨基酸序列的排列組合。多肽文庫是一種強大的篩選工具。它用于從大批量多肽中篩選極少量具有關鍵生物活性的多肽。
2.多肽文庫類型
(1)重疊肽庫:單個肽可以分成幾個重疊的片段。由此產生的重疊肽庫隨后可用于包括連續和線性表位作圖在內的過程。
(2)截斷肽庫:截斷肽庫可用于預測確定表位活性的最小長度氨基酸。
(3)丙氨酸肽掃描文庫:每個氨基酸殘基都被丙氨酸單獨和系統地取代。該庫可以快速確定每個氨基酸對肽功能的貢獻。
(4)隨機肽庫:隨機肽庫被設計為序列優化的工具,選定的位置同時被所有20種天然氨基酸取代,可以增加肽活性。
(5)亂序肽庫:亂序庫在所有肽庫中具有較高的變異性。所得肽通常用作陰性對照,以表明特定序列對蛋白質功能或活性至關重要。它也是一種用于尋找新線索的隨機篩選工具。
(6)位置肽庫:肽序列中選定的位點或區域被系統地替換為所有其他天然氨基酸。這允許識別增強肽活性的氨基酸。
3.多肽文庫篩選應用
多肽文庫在蛋白質組學及其相關領域應用范圍非常廣泛,如藥物研發(科研級 bevacizumab ( cat:yr1001))、蛋白-蛋白相互作用、抗原表位篩選、gpcr配體篩選、蛋白功能分析、酶底物或抑制劑篩選、信使分子研發及多肽/蛋白信號對答等。
4.多肽文庫篩選技術亮點
(1)可以高通量生產,篩選效率高
(2)可快速制備可溶抗原
(3)可以準確的定位抗原決定簇,廣泛用于藥物開發
5.卡梅德生物能夠為客戶提供高質量的肽庫篩選服務
基于噬菌體平臺,卡梅德生物擁有多樣性文庫,如下圖2,可以為客戶構建隨機7肽文庫,12肽文庫,15肽文庫等。卡梅德生物提供的t7噬菌體展示平臺是一種超高通量的配體篩選方式,通過該技術平臺可以構建多達1013/ml個經過噬菌體展示的多肽或抗體克隆,平均可以做到獨立克隆數為109-1010/ml,經過后續多輪淘篩可以提供多達105有效多肽或抗體的序列。
6.卡梅德生物為客戶提供肽庫篩選服務的全流程介紹
肽庫篩選主要分為以下大致流程:目的蛋白質量驗證,噬菌體滴度檢測,噬菌體擴大培養,噬菌體淘選,測序,流程圖如下:
6.1目的蛋白質量驗證
目的蛋白進行sds-page電泳,要求蛋白純度>95%,才能進行下一步文庫篩選。
6.2噬菌體滴度檢測
tg1菌株接種到lb培養基進行活化培養,lb培養基添加瓊脂糖后,按照梯度稀釋法培養噬菌體,培養完成的噬菌體涂布至瓊脂平板,進行噬菌斑計數。
6.3噬菌體擴大培養
tg1菌株培養至od600 0.4 ~0.6后,接種到經過擴大培養的宿主菌種,震蕩離心,上清即為噬菌體培養物。
6.4噬菌體淘選
將純化的目的蛋白用96孔酶標板進行抗原包被過夜,脫脂內粉進行封閉,加入擴大培養的噬菌體孵育,緩沖液多次洗脫,進行噬菌體滴度測定,濃縮純化后等待下一輪篩選。重復以上步驟2次,完成后兩輪篩選。
6.5測序
從第三輪篩選后的細菌平板上挑取48個單克隆,經過擴增培養后提取質粒進行測序。
7.多肽噬菌體展示文庫篩選實驗結果
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