食品安全國家標準GB 31656.16-2022 水產品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留量的測定
中華人民共和國國家標準
gb 31656.16-2022
食品安全國家標準
水產品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留量的測定
氣相色譜法
national food safety standard-
determination of chloramphenicol，thiamphenicol，florfenicoland and
florfenicol-amine residues in aquatic products by gas chromatography
1范圍
本文件規定了水產品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留量測定的制樣和氣相色譜測定方法。
本文件適用于魚、蝦、鱉、貝、海參等水產品可食組織中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺殘留量的測定。
2規范性引用文件
下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
gb/t 6682分析實驗室用水規格和試驗方法
gb/t 30891-2014水產品抽樣規范
3術語和定義
本文件沒有需要界定的術語和定義。
4原理
試樣中殘留的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺，在堿性條件下用乙酸乙酯提取，正己烷去脂，固相萃取柱凈化，硅烷化試劑衍生化，氣相色譜法檢測，外標法定量。
5試劑與材料
除另有規定外，所有試劑均為分析純，水為符合gb/t 6682規定的一級水。
5.1試劑
5.1.1乙腈（ch3cn）：色譜純。
5.1.2甲醇（ch3oh）：色譜純。
5.1.3正己烷（c6h14）：色譜純。
5.1.4乙酸（ch3cooh）：色譜純。
5.1.5乙酸乙酯（c4h8o2）：色譜純。
5.1.6甲苯（c7h8）：色譜純。
5.1.7濃氨水（nh3·h2o）。
5.1.8 n，o-雙（三甲基硅烷基）三氟（fu）乙酰胺（bstfa）：c8h18f3nosi2。
5.1.9三甲基氯硅烷（tmcs）：c3h9clsi。
5.2溶液配制
5.2.1乙酸乙酯-氨水：取濃氨水2 ml，用乙酸乙酯稀釋至100 ml。現用現配。
5.2.2甲醇-氨水：取濃氨水2 ml，用甲醇稀釋至100 ml。現用現配。
5.2.3 5%乙酸溶液：取乙酸5 ml，用水稀釋至100 ml。
5.2.4衍生化試劑：取n，o雙（三甲基硅烷基）三氟（fu）乙酰胺（bstfa）與三甲基氯硅烷（tmcs），按體積比99：1混合。現用現配。
5.3標準品
氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺，含量均≥98%。具體見附錄a。
5.4標準溶液制備
5.4.1標準儲備液：取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺標準品各15mg，精密稱定，分別加乙腈適量使溶解并稀釋定容至100ml棕色容量瓶，配制成濃度均為150μg/ml的標準儲備液。-18℃以下保存，有效期3個月。
5.4.2混合標準工作液：分別準確量取氯霉素標準儲備液1ml，甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺各10ml于50ml容量瓶，用乙腈稀釋至刻度，制成氯霉素濃度為3μg/ml，甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺濃度均為30μg/ml的混合標準工作液。-18℃以下保存，有效期1個月。
5.5材料
5.5.1mcx固相萃取柱：60mg/3ml，或相當者。
5.5.2移液器：20μl~200μl，200μl~1 000μl。
5.5.3雞心瓶：100 ml。
5.5.4聚乙烯離心管：15 ml、50 ml，具塞。
5.5.5玻璃離心管：10 ml，具塞。
5.5.6棕色反應瓶：規格2 ml。
6儀器和設備
6.1氣相色譜儀，配63ni電子捕獲檢測器。
6.2均質機。
6.3旋轉蒸發儀。
6.4離心機。
6.5渦旋混合器。
6.6分析天平：感量0.00001 g和0.01 g。
6.7氮吹儀。
6.8超聲波清洗器。
6.9固相萃取裝置。
7試樣的制備與保存
7.1試樣的制備
按gb/t 30891-2014附錄b的要求制樣。
a）取均質后的供試樣品，作為供試試樣；
b）取均質后的空白樣品，作為空白試樣；
c）取均質后的空白樣品，添加適宜濃度的標準工作液，作為空白添加試樣。
7.2試樣的保存
-18℃以下保存。
8測定步驟
8.1提取
取試料5g（準確至±0.05g），置50ml具塞玻璃離心管中，加乙酸乙酯氨水20ml，立即渦旋1 min，超聲15 min，4 000 r/min離心5 min，取上清液于100 ml雞心瓶中，重復提取1次，合并上清液，加入5%乙酸溶液3 ml，振蕩混勻，40℃旋轉蒸發至約1.5 ml，備用。
8.2凈化
取備用液于10 ml離心管，用5%乙酸1. 5 ml洗滌雞心瓶，洗液并于離心管。加正己烷5 ml，渦旋混合1 min，4 000 r/min離心5min，取水層，用正己烷5 ml重復脫脂1次，取水層，備用。
取mcx固相萃取柱，依次用甲醇3ml、水3ml.活化，取經正己烷脫脂后的備用液，過柱，用5%乙酸溶液2ml淋洗，棄去淋洗液，用甲醇氨水6ml洗脫，收集洗脫液，65℃氮氣吹至近干，再依次用甲醇1 ml乙酸乙酯1 ml洗滌離心管壁，氮氣吹至近干，備用。
8.3衍生
8.3. 1試料的衍生化
取吹干的提取物，加乙腈100μl復溶，移至2 ml棕色反應瓶中，再用100μl清洗并合并至棕色反應瓶中，加行生化試劑100μl，蓋塞并渦旋混合10s，60℃烘箱中反應30 min。冷卻至室溫，50℃~55℃氮氣吹干，準確加入甲苯1.0 ml，渦旋混勻，供氣相色譜儀測定。
8.3.2標準工作液的衍生化
取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺混合標準工作液適量于2ml棕色反應瓶中，置50℃氮吹儀吹干。以下按8.3.1的步驟操作。
8.4標準曲線的制備
分別精密量取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺標準工作液適量，用乙腈稀釋氯霉素濃度為1.0μg/l、1.5μg/l、5.0μg/l、15.0μg/l、50.0μg/l、150.0μg/l，甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺濃度均為10.0μg/l、15.0μg/l、50.0μg/l、150.0μg/l、500.0μg/l、1500.0μg/l的系列標準溶液，經衍生化后，供氣相色譜測定。以測得峰面積為縱坐標、對應的標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。求回歸方程和相關系數。
8.5測定
8.5.1色譜條件
a）色譜柱：db-5ms石英毛細管柱（30 m×0.25mm，膜厚0. 25μm），或相當者；
b）進樣方式：不分流進樣；
c）載氣：氮氣，純度99.999%；
d）柱流速：1.0 mll/min，尾吹為25ml/min；
e）進樣口溫度230℃，檢測器溫度310℃；
f）柱溫程序：起始80℃保持1 min，以30℃/min升溫至280℃，保持5 min；
g）進樣量：1.0μl。
8.5.2測定法
取試料溶液和相應的標準溶液，作單點或多點校準，按外標法，以峰面積計算。標準溶液及試料溶液中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺響應值應在儀器檢測的線性范圍之內。在上述色譜條件下，標準溶液氣相色譜圖見附錄b。
8.5.3空白試驗
取空白試樣，除不加藥物外，采用完（wan）全相同的測定步驟進行平行操作。
9結果計算和表述
試樣中待測物的殘留量，按標準曲線或公式（1）計算。
式中：
x——試樣中待測物殘留量的數值，單位為微克每千克（μg/kg）；
cs——標準溶液中待測物濃度的數值，單位為微克每升（μg/l）；
a——試樣溶液中待測物色譜峰面積；
as——標準溶液中待測物色譜峰面積；
v——試樣溶液最終定容體積的數值，單位為毫升（ml）；
m——供試試樣質量的數值，單位為克（g）。
10方法靈敏度、準確度和精密度
10.1靈敏度
本方法氯霉索的檢測限為0.1μg/kg，甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的檢測限均為1.0μg/kg。氯霉素的定量限為0.3μg/kg，甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的定量限均為3.0μg/kg。
10.2準確度
本方法氯霉素在0.3μg/ kg~30.0μg/kg添加水平上的回收率70%~120%；甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺在3.0μg/hg~ 300μg/kg添加水平上的回收率灼為70%~120%。
10.3精密度
本方法批內相對標準偏差≤20%，批間相對標準偏差≤20%。
小型生活污水處理設備安裝、調試與維護
雙端面磨床的工作原理和應用領域
在使用潛水曝氣機時應當注意哪些事項
有機廢氣處理如何正確選購活性炭
768道基因合成儀還擁有多重合成、多樣性設計等功能
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湖北省客運集團毛知兵關于壓板油缸技術支持回復
預熱|翻了翻兩會要點，和新能源有關的還真不少！
市場上電動掃地車如何選擇？
專業的橡塑板廠家橡塑保溫板為什么會有彈性
德國西門子衡水PLC模塊一級代理
立式加工中心日常維護部件的方法
伺服電機未來的性能轉變
細分領域日逐完善 第三方檢測發展勢頭強勁
渦輪法蘭襯氟蝶閥D341F46-16C實用場景與技術參數
高手教你，小型外圓磨床加工方法與技巧
tert-Butyl-DCL-hexyl-NHS ester可與其他化合物或材料結合
醫療器械密封性測試儀-檢測
電流表的使用方法
DANFOSS丹佛斯液位傳感器的工作原理
gb 31656.16-2022
食品安全國家標準
水產品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留量的測定
氣相色譜法
national food safety standard-
determination of chloramphenicol，thiamphenicol，florfenicoland and
florfenicol-amine residues in aquatic products by gas chromatography
1范圍
本文件規定了水產品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留量測定的制樣和氣相色譜測定方法。
本文件適用于魚、蝦、鱉、貝、海參等水產品可食組織中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺殘留量的測定。
2規范性引用文件
下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
gb/t 6682分析實驗室用水規格和試驗方法
gb/t 30891-2014水產品抽樣規范
3術語和定義
本文件沒有需要界定的術語和定義。
4原理
試樣中殘留的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺，在堿性條件下用乙酸乙酯提取，正己烷去脂，固相萃取柱凈化，硅烷化試劑衍生化，氣相色譜法檢測，外標法定量。
5試劑與材料
除另有規定外，所有試劑均為分析純，水為符合gb/t 6682規定的一級水。
5.1試劑
5.1.1乙腈（ch3cn）：色譜純。
5.1.2甲醇（ch3oh）：色譜純。
5.1.3正己烷（c6h14）：色譜純。
5.1.4乙酸（ch3cooh）：色譜純。
5.1.5乙酸乙酯（c4h8o2）：色譜純。
5.1.6甲苯（c7h8）：色譜純。
5.1.7濃氨水（nh3·h2o）。
5.1.8 n，o-雙（三甲基硅烷基）三氟（fu）乙酰胺（bstfa）：c8h18f3nosi2。
5.1.9三甲基氯硅烷（tmcs）：c3h9clsi。
5.2溶液配制
5.2.1乙酸乙酯-氨水：取濃氨水2 ml，用乙酸乙酯稀釋至100 ml。現用現配。
5.2.2甲醇-氨水：取濃氨水2 ml，用甲醇稀釋至100 ml。現用現配。
5.2.3 5%乙酸溶液：取乙酸5 ml，用水稀釋至100 ml。
5.2.4衍生化試劑：取n，o雙（三甲基硅烷基）三氟（fu）乙酰胺（bstfa）與三甲基氯硅烷（tmcs），按體積比99：1混合。現用現配。
5.3標準品
氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺，含量均≥98%。具體見附錄a。
5.4標準溶液制備
5.4.1標準儲備液：取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺標準品各15mg，精密稱定，分別加乙腈適量使溶解并稀釋定容至100ml棕色容量瓶，配制成濃度均為150μg/ml的標準儲備液。-18℃以下保存，有效期3個月。
5.4.2混合標準工作液：分別準確量取氯霉素標準儲備液1ml，甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺各10ml于50ml容量瓶，用乙腈稀釋至刻度，制成氯霉素濃度為3μg/ml，甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺濃度均為30μg/ml的混合標準工作液。-18℃以下保存，有效期1個月。
5.5材料
5.5.1mcx固相萃取柱：60mg/3ml，或相當者。
5.5.2移液器：20μl~200μl，200μl~1 000μl。
5.5.3雞心瓶：100 ml。
5.5.4聚乙烯離心管：15 ml、50 ml，具塞。
5.5.5玻璃離心管：10 ml，具塞。
5.5.6棕色反應瓶：規格2 ml。
6儀器和設備
6.1氣相色譜儀，配63ni電子捕獲檢測器。
6.2均質機。
6.3旋轉蒸發儀。
6.4離心機。
6.5渦旋混合器。
6.6分析天平：感量0.00001 g和0.01 g。
6.7氮吹儀。
6.8超聲波清洗器。
6.9固相萃取裝置。
7試樣的制備與保存
7.1試樣的制備
按gb/t 30891-2014附錄b的要求制樣。
a）取均質后的供試樣品，作為供試試樣；
b）取均質后的空白樣品，作為空白試樣；
c）取均質后的空白樣品，添加適宜濃度的標準工作液，作為空白添加試樣。
7.2試樣的保存
-18℃以下保存。
8測定步驟
8.1提取
取試料5g（準確至±0.05g），置50ml具塞玻璃離心管中，加乙酸乙酯氨水20ml，立即渦旋1 min，超聲15 min，4 000 r/min離心5 min，取上清液于100 ml雞心瓶中，重復提取1次，合并上清液，加入5%乙酸溶液3 ml，振蕩混勻，40℃旋轉蒸發至約1.5 ml，備用。
8.2凈化
取備用液于10 ml離心管，用5%乙酸1. 5 ml洗滌雞心瓶，洗液并于離心管。加正己烷5 ml，渦旋混合1 min，4 000 r/min離心5min，取水層，用正己烷5 ml重復脫脂1次，取水層，備用。
取mcx固相萃取柱，依次用甲醇3ml、水3ml.活化，取經正己烷脫脂后的備用液，過柱，用5%乙酸溶液2ml淋洗，棄去淋洗液，用甲醇氨水6ml洗脫，收集洗脫液，65℃氮氣吹至近干，再依次用甲醇1 ml乙酸乙酯1 ml洗滌離心管壁，氮氣吹至近干，備用。
8.3衍生
8.3. 1試料的衍生化
取吹干的提取物，加乙腈100μl復溶，移至2 ml棕色反應瓶中，再用100μl清洗并合并至棕色反應瓶中，加行生化試劑100μl，蓋塞并渦旋混合10s，60℃烘箱中反應30 min。冷卻至室溫，50℃~55℃氮氣吹干，準確加入甲苯1.0 ml，渦旋混勻，供氣相色譜儀測定。
8.3.2標準工作液的衍生化
取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺混合標準工作液適量于2ml棕色反應瓶中，置50℃氮吹儀吹干。以下按8.3.1的步驟操作。
8.4標準曲線的制備
分別精密量取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺標準工作液適量，用乙腈稀釋氯霉素濃度為1.0μg/l、1.5μg/l、5.0μg/l、15.0μg/l、50.0μg/l、150.0μg/l，甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺濃度均為10.0μg/l、15.0μg/l、50.0μg/l、150.0μg/l、500.0μg/l、1500.0μg/l的系列標準溶液，經衍生化后，供氣相色譜測定。以測得峰面積為縱坐標、對應的標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。求回歸方程和相關系數。
8.5測定
8.5.1色譜條件
a）色譜柱：db-5ms石英毛細管柱（30 m×0.25mm，膜厚0. 25μm），或相當者；
b）進樣方式：不分流進樣；
c）載氣：氮氣，純度99.999%；
d）柱流速：1.0 mll/min，尾吹為25ml/min；
e）進樣口溫度230℃，檢測器溫度310℃；
f）柱溫程序：起始80℃保持1 min，以30℃/min升溫至280℃，保持5 min；
g）進樣量：1.0μl。
8.5.2測定法
取試料溶液和相應的標準溶液，作單點或多點校準，按外標法，以峰面積計算。標準溶液及試料溶液中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺響應值應在儀器檢測的線性范圍之內。在上述色譜條件下，標準溶液氣相色譜圖見附錄b。
8.5.3空白試驗
取空白試樣，除不加藥物外，采用完（wan）全相同的測定步驟進行平行操作。
9結果計算和表述
試樣中待測物的殘留量，按標準曲線或公式（1）計算。
式中：
x——試樣中待測物殘留量的數值，單位為微克每千克（μg/kg）；
cs——標準溶液中待測物濃度的數值，單位為微克每升（μg/l）；
a——試樣溶液中待測物色譜峰面積；
as——標準溶液中待測物色譜峰面積；
v——試樣溶液最終定容體積的數值，單位為毫升（ml）；
m——供試試樣質量的數值，單位為克（g）。
10方法靈敏度、準確度和精密度
10.1靈敏度
本方法氯霉索的檢測限為0.1μg/kg，甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的檢測限均為1.0μg/kg。氯霉素的定量限為0.3μg/kg，甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的定量限均為3.0μg/kg。
10.2準確度
本方法氯霉素在0.3μg/ kg~30.0μg/kg添加水平上的回收率70%~120%；甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺在3.0μg/hg~ 300μg/kg添加水平上的回收率灼為70%~120%。
10.3精密度
本方法批內相對標準偏差≤20%，批間相對標準偏差≤20%。
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雙端面磨床的工作原理和應用領域
在使用潛水曝氣機時應當注意哪些事項
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