calcein am，中文名鈣黃綠素乙酰氧基甲酯，是一種可滲透進入細胞、常用于測定真核細胞活力或線粒體通透性轉換孔(mitochondrial permeability transition pore, mptp)的綠色熒光探針。calcein am近年來被廣泛應用到細胞活性分析實驗中。
流式細胞儀
ex:
532/561 nm
em：
585/40 nm
熒光顯微鏡
ex:tritc 濾波片組
em：tritc 濾波片組
推薦孔板:黑色透明底板
熒光酶標儀
ex:540 nm
em：590 nm
cutoff：570 nm
推薦孔板:黑色透明底板
讀取模式：底讀模式
實驗方案：
操作步驟
1.準備hhbs緩沖液，10％pluronic®f-127溶液和25 mm probenecid溶液。
2.在高質量無水dmso中制備2 mm至5 mm calcein red am原液。
2.1使用calcein red am的量：1毫克
2.2所需濃度：2 mm
2.3在合適的容器中，將1mg calcein red tm am與492.23μl無水dmso混合。
3.使用10μmcalceinred am 4在hhbs中制備2x工作溶液，0.08％pluronic®f-127和2 mm*磺舒。
3.1終孔內濃度的calcein red am：5μm
3.2pluronic®f-127的終井內濃度：0.04％
3.3終孔內濃度的*磺舒：1mm
3.4在合適的容器中，混合16μl的calcein red am，25.6μl的10％pluronic f-127和256μl的25mm*磺舒。然后，添加hhbs或您選擇的緩沖液，直到體積為3.2 ml。
注意：對于大多數細胞系，我們建議calcein red am的終濃度為4至5μm。
注意：推薦的pluronic f-127孔濃度終為0.02％至0.04％。
注意：推薦的終濃度為1至2.5 mm的probenecid。
4.將100μl染料工作溶液加入已經含有100μl培養基的所需孔中。
4.1該步驟將染料工作溶液從2x稀釋至1x，并將每種組分的終濃度調節至以下：5μm的calcein red am，0.04％pluronic f-127,1mm*磺舒。
5.孵育染料
5.1將染料加載板在細胞培養箱中孵育20-60分鐘。
5.2將染料加載板在室溫下孵育30分鐘。
6.用1.0 mm probenecid準備hhbs緩沖液（或您選擇的緩沖液）。
6.1在合適的容器中加入160μl的25mm*磺舒。然后，添加hhbs或您選擇的緩沖液，直到體積為4 ml。
7.用hhbs緩沖液或您選擇的緩沖液替換染料工作溶液，使用1.0 mm probenecid。
7.1首先，從所需孔中除去200μl染料工作溶液和培養基。
7.2在相同的孔中加入200μl含有1.0mm*磺舒的hhbs（或您選擇的緩沖液）。
8.運行實驗
8.1為您的樣品添加所需的處理。
8.2以ex / em = 560/574 nm運行實驗
圖1所示。海拉細胞生活的照片沾鈣黃綠素紅tm, (cat.21900)。細胞核染色了赫斯特33342年(藍色, 17535)。
圖2。海拉細胞彩色圖像用鈣黃綠素紅™。左:活海拉細胞;右:固定的海拉細胞。
關鍵詞：流式細胞儀 熒光顯微鏡 熒光酶標儀 細胞培養箱

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