智立中特各種細胞的培養方法
細胞培養技術是細胞生物學研究方法中重要和常用技術，通過細胞培養既可以獲得大量細胞，又可以借此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。
微血管內皮細胞培養方法
方法一
步驟如下：
取體質量60-70g雄性sd大鼠
無菌條件下取出大腦
放預冷dhank′s中
剝離軟腦膜、大血管及大腦髓質
收集大腦皮質,剪碎成1mm3的小塊
移入勻漿器中勻漿,將勻漿液依次通過80目和200目尼龍網過濾
收集200目尼龍網上的微血管段。用0.12%膠原酶37℃消化20min
沖洗液沖洗2遍,離心所得沉淀用配制的內皮細胞完，全培懸浮后
接種于明膠預先包被的培養瓶中,37℃,5%co2培養箱中靜置培養
約6-7天細胞基本融合成片后,用01125%胰，蛋白酶+0102%edta消化,進行傳代
方法二
選用dmem高糖培養基
1.取5-7天大鼠心臟，用pbs洗凈血液
2.用75%乙醇浸泡30s
3.用pbs沖洗后，剪碎，用適量0.5%膠原酶在37度搖擺水浴中消化30min，加入適量0.02%胰，蛋白酶，用吸管輕輕吹打，37度水浴中消化30min。
4.分離下的細胞過200目篩網，過濾液用20%小牛血清dmem培養基混懸離心（1000轉/min，5min），未過網的棄之。
5.所得細胞懸于20%小牛血清dmem培養基，并調整細胞濃度到104-105/ml，接種于0.2%明膠預處理的培養瓶中37度培養4小時，以去除未黏附細胞，更換含50mg/l肝素、10mg/l內皮細胞生長因子的dmem完，全培養基培養。
6.每3-4天換液一次，直至長成細胞單層，選3-4代傳代內皮細胞，0.25%胰，蛋白酶消化備用。
小鼠心肌細胞培養方法
1.制備心肌細胞用出生一天的乳鼠最，好。
2.制備心肌細胞用試驗方法書上的方法，取心尖部用pps洗清，要剪粹0.1mm，注意器械無菌。
3.培養基有進口的dmem，用20%的胎牛血清，加雙抗，注意操作的無菌。
4.用分次消化法，在此37度的搖床中進行分次消化法，消化時間要把握好，不然大過，吹打要把握好。
5.消化好后直接接種于96孔板中進行試驗備用，離心的速度不能大快，否則心肌細胞就會有很多死細胞。
6.我用二次差速的方法來純化心肌細胞，每次1.5小時，差速后的細胞種在96孔板中并加上一定量的殺非心肌細胞的物質，三天，經研究加五天也行對細胞沒有很多影響。
7.心肌細胞有大部分的心肌纖維細胞和心肌細胞，而心肌細胞又分為m心肌細胞和f心肌細胞，我們用于研究用的心肌細胞最，好用m心肌細胞，因為m心肌細胞跳動很明顯。
8.要很好的把握好試驗的時間
心肌細胞培養方法詳述配液：hanks液、低糖dmem液、高糖dmem液、胰，酶消化液、雙抗液、碳，酸氫鈉液、鹽酸液。
取鼠：鼠盆用棉鋪好，取鼠。
準備：事先檢查顯微鏡、磁力攪拌器及離心機是否好用，提前三小時把胎牛血清、胰，酶、抗生素拿出來化開。其余未凍藥品也提前20分鐘拿出來緩和一下。新潔爾滅（0.1％）泡紗布（用10ml5％的新潔爾滅加水至500ml即得），消毒地面（1：500的84液）。
用酒精棉球擦拭臺面后把物品擺放好，開紫外線燈照30分鐘后開鼓風機吹至實驗結束。
物品：白大衣、飯盒、小剪子、小鑷子（4套）（一套剪皮膚、一套開胸取心，一套剔除心緣纖維組織，一套剪碎心臟）、瓶皿（2套）[兩個小圓培養皿，培養皿內加dmem液，先后裝取出的心和剔出纖維組織后的心][一個小燒杯裝碘酒和酒精棉球]、250ml燒杯3個[一個用于水浴，事先加好水，最，好是一或二蒸][一個裝0.1％新潔爾滅150ml左右，消毒小鼠]、500ml燒杯1個，用作廢液缸、50ml燒杯3個（剪碎心肌組織，最后配液）、三角燒杯（50ml）+小轉子（小轉子，酒精擦，雙蒸水沖后，再把酒精徹，底沖掉后用三角燒杯高壓）；離心管及帽（12-14個），兩個試管吸管（5~8個）大鑷子（兩把，持物，例夾棉球等）
臺面：磁力攪拌器、紗布（事先用于托盤裝0.1％新潔爾滅浸泡）、試管架、泡沫塑料板、五個針頭（不用消毒）75％酒精棉球及碘酒（消，毒，棉球，泡酒精、碘酒）大鑷子兩把（一把夾棉球，一把取鼠）、3個250ml燒瓶（一個裝一蒸水，一個裝新潔爾滅，另一為空的備用）1個500ml燒瓶（廢液缸）、溫度計、ph試紙（事先調ph值）、酒精燈、打火機/火柴、載玻片（5-10個）[用于培養前看接種密度及消化后看細胞密度]、注射器5ml 6個（胰，酶、dmem、胎牛血清）1ml 2個（雙抗液）20ml備用2個、微量加樣器1000ml及500ml
以上物品均用紫外線照30分鐘。
另外準備手套、帽子、口罩、24孔培養板、離心機+一把小鎖、未凍藥品及dmem、nahco3、胎牛血清。
事先把顯微鏡、離心機、磁力攪拌器電源插好。檢查酒精燈是否有酒精，碘酒和酒精棉球是否夠用。先把物品遞入，后穿大衣、帽子和口罩。然后把酒精燈打開，把瓶皿擺好，再用一個瓶皿裝酒精棉球。
培養過程：
1.把兩個5ml注射器分別插入dmem和胰，酶中，分別向兩個圓皿中加入5ml的dmem培養液。用一把大鑷子從鼠盆里取出一只生后2~3天的sd大鼠，放入0.1％新潔爾滅浸泡一下后拿出放在泡沫板上，用針頭把鼠固定（位置擺正），用另一把大鑷子取碘酒棉球擦皮膚，再用酒精棉球脫碘，取一把小剪子及小鑷子開皮，充分撕拉開，再用酒精棉球消毒，后換另一把小剪子和鑷子在劍突處正中線稍偏左開胸取心。
2.取出的心放在剛才準備的一個裝有dmem的圓皿中再取下一只。重復以上過程。（鼠全部殺死后，把取鼠鑷及泡沫板、新潔爾滅缸等拿**面。消毒、清潔，鋪紗布、換手套。
3．用第三副剪子和鑷子把圓皿中的心臟周邊的血凝及纖維組織剔除掉，放在另一個預先裝好dmem的圓皿中。抽取5ml的胰，酶，然后將其中少許放入50ml的小燒杯中，大部分倒入三角燒瓶中。用第四副剪子將燒杯中的心臟剪成1mm3的碎塊，倒入三角燒瓶中（可用剪刀刮入），再用剩余胰，酶刷凈燒杯。
4．把溫度計和三角燒杯放入250ml燒瓶中，（事先調好水量，多會沒過三角燒杯，少溫度會不均勻）。打開磁力攪拌器電源，調溫度（使-緩慢加到34~35℃）和轉速（轉速不可過快，否則會打碎細胞，基本上標志為平行）。一定要注意監控。
5．溫度達到34℃時開始計時，第，一次為10分鐘，以后可為8分鐘，事情況而定。在此期間，在試管架上擺上5、6個離心管，標上1、1，2、2。其中在1號兩管事先加入dmem液各2毫升
6．10分鐘后，把三角燒瓶取下，磁力攪拌器關上，用一個吸管輕輕吹打（使消化下來的細胞徹，底從組織團快上掉下來），這個吸管（1）用后固定放在一個離心管中，以后每次消化后取下都用其吹打幾下，第，一次上清棄去，然后向兩個1號管分別倒入2ml上清（盡量不要把組織倒出，也不要剩液太多，以免消化下的細胞重復消化造成損傷），用另一個吸管（2）混勻配平兩個管（即兩個管水平高度相同），輕輕吹打，以免損壞細胞。
7．接著把這兩個離心管放入離心機中，調10分鐘，800或1000轉，墊小鎖，打開關。
8．同時向三角燒瓶中加入5ml胰，酶，繼續消化8分鐘，注意控制溫度。此時向兩個2號管中分別加入2mldmem液。
9．取下三角燒瓶，仍用1號吸管吹打，后靜置片刻向兩個2號管分別倒入2毫升的上清，取出兩個離心后的1號管，把上清液沿細胞貼壁一方慢慢倒掉，后向其中一管加入4ml的dmem液，用2號吸管取少量液體加入另一個離心管中，把管底的沉淀細胞洗下來，把液體全部移入其中一管，三個管（1個1號管，兩個2號管）配平，放入離心管中，離心十分鐘。同時仍加5ml的胰，酶，放入三角燒瓶中，繼續消化（注意控制溫度，達34℃時計時）。
10．消化到4次左右，吹打均勻后，吸一滴滴在載玻片上，拿到鏡下觀察消化情況，決定消化次數。
11．離心2次的吸管，放在試管架上，待離心過程全部完事后，把各管上清液倒掉，在各管加上3ml（不用精確，大致這樣）dmem液，記住共加入多少dmem液的量，換吸管（3號）把各管底細胞塊吸下吹打均勻后，移入50ml燒杯中，然后用注射器抽取余量的dmem加入燒杯中，加入小牛血清及抗生素，換吸管（4號）吹打均勻。
12．取出24孔培養板，一個人吹打，另一個人用加樣器加藥。封蓋時過火，蓋上蓋，放在co2孵箱。24小時后觀察是否貼壁。
（24孔板，每孔最多加2ml，一般加液時每孔加1~1.5ml）
配藥：天平、量筒、燒杯、玻璃棒、二蒸水、硫酸紙。
ne：加樣器1000μl大頭一個或1ml注射器一個，50μl小頭一個。量筒100ml，燒杯100毫升。
配法：抽取0.85mlne液，放入燒杯，再加二蒸水99.15ml補足至100ml，備用。在工作臺內，用針頭濾器濾過（儀器：針頭濾器及膜，先試膜，再高壓消毒，注意壓力），在一個新的100ml燒杯內。取4個50ml的燒杯，分別標號1、2、3、4。然后用加樣器（100μl）分別取0.1mlne放入3、4杯內。
小牛血清：先配初液，即0.4ml/10ml（用低糖dmem配，0.4ml牛血清需500μl加樣器一個）。配成后即為4％的濃度。分別取0.1ml放入1、2、3、4號的50ml的燒杯內。
抗生素：分別取0.1ml放入1、2、3、4號的50ml的燒杯內。
分別向1、2、3、4號的50ml的燒杯內加入dmem。各為9.7ml、9.7ml、9.6ml、9.6ml。用4個吸管吹打均勻，然后用加樣器每組加1.0ml。另一人用吸管吸出培養液。每組換一個大頭。
進口油過濾器 德國萊克LIK進口油過濾器 德國萊克LIK閥門
硫酸儲罐的選材及防腐措施
外墻熱固復合硅質板
蘇州出租二手地磅
保證通風柜變風量系統的安全性十分重要
智立中特各種細胞的培養方法
吊秤的原理和結構
2019年造紙廠污水處理設備處理工藝
單面扶欄**秤,300kg*電子*秤品牌
定做熱縮帶的驗收標準
Q641F46氣動帶手動襯氟球閥Q6S41F46-16C氣動帶手輪襯氟球閥產品特點
atago數顯粘度計的類型和測試原理
思達高科樹脂澆鑄體試驗機（檢測拉壓及抗彎性能）
永之祥機械-大米加工成套設備零部件的保養常識
KIKUSUI菊水交流耐壓測試儀高壓發生電路的方法
包裝秤常見故障原因及處理故障檢查方法
聚氨酯保溫管用于室內外各種管道
避雷器恒溫水煮試驗箱的使用流程
減速機的作用以及好處
膜過濾設備廠家的選擇條件
微血管內皮細胞培養方法
方法一
步驟如下：
取體質量60-70g雄性sd大鼠
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剝離軟腦膜、大血管及大腦髓質
收集大腦皮質,剪碎成1mm3的小塊
移入勻漿器中勻漿,將勻漿液依次通過80目和200目尼龍網過濾
收集200目尼龍網上的微血管段。用0.12%膠原酶37℃消化20min
沖洗液沖洗2遍,離心所得沉淀用配制的內皮細胞完，全培懸浮后
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約6-7天細胞基本融合成片后,用01125%胰，蛋白酶+0102%edta消化,進行傳代
方法二
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1.取5-7天大鼠心臟，用pbs洗凈血液
2.用75%乙醇浸泡30s
3.用pbs沖洗后，剪碎，用適量0.5%膠原酶在37度搖擺水浴中消化30min，加入適量0.02%胰，蛋白酶，用吸管輕輕吹打，37度水浴中消化30min。
4.分離下的細胞過200目篩網，過濾液用20%小牛血清dmem培養基混懸離心（1000轉/min，5min），未過網的棄之。
5.所得細胞懸于20%小牛血清dmem培養基，并調整細胞濃度到104-105/ml，接種于0.2%明膠預處理的培養瓶中37度培養4小時，以去除未黏附細胞，更換含50mg/l肝素、10mg/l內皮細胞生長因子的dmem完，全培養基培養。
6.每3-4天換液一次，直至長成細胞單層，選3-4代傳代內皮細胞，0.25%胰，蛋白酶消化備用。
小鼠心肌細胞培養方法
1.制備心肌細胞用出生一天的乳鼠最，好。
2.制備心肌細胞用試驗方法書上的方法，取心尖部用pps洗清，要剪粹0.1mm，注意器械無菌。
3.培養基有進口的dmem，用20%的胎牛血清，加雙抗，注意操作的無菌。
4.用分次消化法，在此37度的搖床中進行分次消化法，消化時間要把握好，不然大過，吹打要把握好。
5.消化好后直接接種于96孔板中進行試驗備用，離心的速度不能大快，否則心肌細胞就會有很多死細胞。
6.我用二次差速的方法來純化心肌細胞，每次1.5小時，差速后的細胞種在96孔板中并加上一定量的殺非心肌細胞的物質，三天，經研究加五天也行對細胞沒有很多影響。
7.心肌細胞有大部分的心肌纖維細胞和心肌細胞，而心肌細胞又分為m心肌細胞和f心肌細胞，我們用于研究用的心肌細胞最，好用m心肌細胞，因為m心肌細胞跳動很明顯。
8.要很好的把握好試驗的時間
心肌細胞培養方法詳述配液：hanks液、低糖dmem液、高糖dmem液、胰，酶消化液、雙抗液、碳，酸氫鈉液、鹽酸液。
取鼠：鼠盆用棉鋪好，取鼠。
準備：事先檢查顯微鏡、磁力攪拌器及離心機是否好用，提前三小時把胎牛血清、胰，酶、抗生素拿出來化開。其余未凍藥品也提前20分鐘拿出來緩和一下。新潔爾滅（0.1％）泡紗布（用10ml5％的新潔爾滅加水至500ml即得），消毒地面（1：500的84液）。
用酒精棉球擦拭臺面后把物品擺放好，開紫外線燈照30分鐘后開鼓風機吹至實驗結束。
物品：白大衣、飯盒、小剪子、小鑷子（4套）（一套剪皮膚、一套開胸取心，一套剔除心緣纖維組織，一套剪碎心臟）、瓶皿（2套）[兩個小圓培養皿，培養皿內加dmem液，先后裝取出的心和剔出纖維組織后的心][一個小燒杯裝碘酒和酒精棉球]、250ml燒杯3個[一個用于水浴，事先加好水，最，好是一或二蒸][一個裝0.1％新潔爾滅150ml左右，消毒小鼠]、500ml燒杯1個，用作廢液缸、50ml燒杯3個（剪碎心肌組織，最后配液）、三角燒杯（50ml）+小轉子（小轉子，酒精擦，雙蒸水沖后，再把酒精徹，底沖掉后用三角燒杯高壓）；離心管及帽（12-14個），兩個試管吸管（5~8個）大鑷子（兩把，持物，例夾棉球等）
臺面：磁力攪拌器、紗布（事先用于托盤裝0.1％新潔爾滅浸泡）、試管架、泡沫塑料板、五個針頭（不用消毒）75％酒精棉球及碘酒（消，毒，棉球，泡酒精、碘酒）大鑷子兩把（一把夾棉球，一把取鼠）、3個250ml燒瓶（一個裝一蒸水，一個裝新潔爾滅，另一為空的備用）1個500ml燒瓶（廢液缸）、溫度計、ph試紙（事先調ph值）、酒精燈、打火機/火柴、載玻片（5-10個）[用于培養前看接種密度及消化后看細胞密度]、注射器5ml 6個（胰，酶、dmem、胎牛血清）1ml 2個（雙抗液）20ml備用2個、微量加樣器1000ml及500ml
以上物品均用紫外線照30分鐘。
另外準備手套、帽子、口罩、24孔培養板、離心機+一把小鎖、未凍藥品及dmem、nahco3、胎牛血清。
事先把顯微鏡、離心機、磁力攪拌器電源插好。檢查酒精燈是否有酒精，碘酒和酒精棉球是否夠用。先把物品遞入，后穿大衣、帽子和口罩。然后把酒精燈打開，把瓶皿擺好，再用一個瓶皿裝酒精棉球。
培養過程：
1.把兩個5ml注射器分別插入dmem和胰，酶中，分別向兩個圓皿中加入5ml的dmem培養液。用一把大鑷子從鼠盆里取出一只生后2~3天的sd大鼠，放入0.1％新潔爾滅浸泡一下后拿出放在泡沫板上，用針頭把鼠固定（位置擺正），用另一把大鑷子取碘酒棉球擦皮膚，再用酒精棉球脫碘，取一把小剪子及小鑷子開皮，充分撕拉開，再用酒精棉球消毒，后換另一把小剪子和鑷子在劍突處正中線稍偏左開胸取心。
2.取出的心放在剛才準備的一個裝有dmem的圓皿中再取下一只。重復以上過程。（鼠全部殺死后，把取鼠鑷及泡沫板、新潔爾滅缸等拿**面。消毒、清潔，鋪紗布、換手套。
3．用第三副剪子和鑷子把圓皿中的心臟周邊的血凝及纖維組織剔除掉，放在另一個預先裝好dmem的圓皿中。抽取5ml的胰，酶，然后將其中少許放入50ml的小燒杯中，大部分倒入三角燒瓶中。用第四副剪子將燒杯中的心臟剪成1mm3的碎塊，倒入三角燒瓶中（可用剪刀刮入），再用剩余胰，酶刷凈燒杯。
4．把溫度計和三角燒杯放入250ml燒瓶中，（事先調好水量，多會沒過三角燒杯，少溫度會不均勻）。打開磁力攪拌器電源，調溫度（使-緩慢加到34~35℃）和轉速（轉速不可過快，否則會打碎細胞，基本上標志為平行）。一定要注意監控。
5．溫度達到34℃時開始計時，第，一次為10分鐘，以后可為8分鐘，事情況而定。在此期間，在試管架上擺上5、6個離心管，標上1、1，2、2。其中在1號兩管事先加入dmem液各2毫升
6．10分鐘后，把三角燒瓶取下，磁力攪拌器關上，用一個吸管輕輕吹打（使消化下來的細胞徹，底從組織團快上掉下來），這個吸管（1）用后固定放在一個離心管中，以后每次消化后取下都用其吹打幾下，第，一次上清棄去，然后向兩個1號管分別倒入2ml上清（盡量不要把組織倒出，也不要剩液太多，以免消化下的細胞重復消化造成損傷），用另一個吸管（2）混勻配平兩個管（即兩個管水平高度相同），輕輕吹打，以免損壞細胞。
7．接著把這兩個離心管放入離心機中，調10分鐘，800或1000轉，墊小鎖，打開關。
8．同時向三角燒瓶中加入5ml胰，酶，繼續消化8分鐘，注意控制溫度。此時向兩個2號管中分別加入2mldmem液。
9．取下三角燒瓶，仍用1號吸管吹打，后靜置片刻向兩個2號管分別倒入2毫升的上清，取出兩個離心后的1號管，把上清液沿細胞貼壁一方慢慢倒掉，后向其中一管加入4ml的dmem液，用2號吸管取少量液體加入另一個離心管中，把管底的沉淀細胞洗下來，把液體全部移入其中一管，三個管（1個1號管，兩個2號管）配平，放入離心管中，離心十分鐘。同時仍加5ml的胰，酶，放入三角燒瓶中，繼續消化（注意控制溫度，達34℃時計時）。
10．消化到4次左右，吹打均勻后，吸一滴滴在載玻片上，拿到鏡下觀察消化情況，決定消化次數。
11．離心2次的吸管，放在試管架上，待離心過程全部完事后，把各管上清液倒掉，在各管加上3ml（不用精確，大致這樣）dmem液，記住共加入多少dmem液的量，換吸管（3號）把各管底細胞塊吸下吹打均勻后，移入50ml燒杯中，然后用注射器抽取余量的dmem加入燒杯中，加入小牛血清及抗生素，換吸管（4號）吹打均勻。
12．取出24孔培養板，一個人吹打，另一個人用加樣器加藥。封蓋時過火，蓋上蓋，放在co2孵箱。24小時后觀察是否貼壁。
（24孔板，每孔最多加2ml，一般加液時每孔加1~1.5ml）
配藥：天平、量筒、燒杯、玻璃棒、二蒸水、硫酸紙。
ne：加樣器1000μl大頭一個或1ml注射器一個，50μl小頭一個。量筒100ml，燒杯100毫升。
配法：抽取0.85mlne液，放入燒杯，再加二蒸水99.15ml補足至100ml，備用。在工作臺內，用針頭濾器濾過（儀器：針頭濾器及膜，先試膜，再高壓消毒，注意壓力），在一個新的100ml燒杯內。取4個50ml的燒杯，分別標號1、2、3、4。然后用加樣器（100μl）分別取0.1mlne放入3、4杯內。
小牛血清：先配初液，即0.4ml/10ml（用低糖dmem配，0.4ml牛血清需500μl加樣器一個）。配成后即為4％的濃度。分別取0.1ml放入1、2、3、4號的50ml的燒杯內。
抗生素：分別取0.1ml放入1、2、3、4號的50ml的燒杯內。
分別向1、2、3、4號的50ml的燒杯內加入dmem。各為9.7ml、9.7ml、9.6ml、9.6ml。用4個吸管吹打均勻，然后用加樣器每組加1.0ml。另一人用吸管吸出培養液。每組換一個大頭。
進口油過濾器 德國萊克LIK進口油過濾器 德國萊克LIK閥門
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