1. 蛋清樣品的準(zhǔn)備市售新鮮雞蛋5個(gè)，破蛋殼取出蛋清，加入1.5倍體積的0.1 mol/l磷酸鹽緩沖液，ph 7.0，攪拌均勻，并調(diào)ph 7.0，然后用八層紗布過(guò)濾，留取上清液，量取體積并記錄，留0.4ml上清液，并加入0.4ml甘油－20℃凍存?zhèn)溆谩?.陽(yáng)離子交換層析（1）陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的再生：20g amberlite-cg-50陽(yáng)離子交換樹(shù)脂用0.5mol/l naoh浸泡30min，水洗至中性，再用0.5mol/l hcl浸泡30min，水洗至中性。（2）平衡：在燒杯中將再生好的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂中用0.1mol/l 磷酸鹽緩沖液，ph 7.0平衡。（3）吸附：在已平衡好的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂中加入蛋清樣品，攪拌吸附1h（不能用磁力攪拌器）。（4）洗滌：倒去其余上清液，樹(shù)脂用100ml0.1mol/l 磷酸鹽緩沖液，ph 7.0洗滌3遍。（5）裝柱：將樹(shù)脂攪拌均勻裝入2.6cm×30cm層析柱，再用300ml含0.05 mol/l nacl的0.1mol/l磷酸鹽緩沖液,ph7.0洗滌雜蛋白。（裝柱前，先檢測(cè)層析柱是否潔凈，保證所有接頭密閉、管道暢通；裝柱時(shí)，流速不得超過(guò)3ml/min，全過(guò)程不能出現(xiàn)“流干”現(xiàn)象）（6）洗脫：用300ml含0.5 mol/l nacl的0.1mol/l磷酸鹽緩沖液,ph7.0以3ml/min流速進(jìn)行洗脫，合并光吸收高峰管，量取體積并記錄，留0.4ml上清液并加入0.4ml甘油－20℃凍存?zhèn)溆谩?. 硫酸銨沉淀每100ml上清液中緩慢加入35g固體硫酸銨，溶解后凈置30min，10 000r/min離心10min，沉淀用0.5ml左右含0.1mol/l nacl的0.1mol/l 磷酸鹽緩沖液，ph 7.0溶解，留0.05ml上清液，并加入0.05ml甘油，－20℃凍存?zhèn)溆谩?. 分子篩層析將溶解后的硫酸銨沉淀樣品10 000r/min離心3min、上光已用ph 7.0 0.1mol/l nacl的0.1mol/l 磷酸鹽緩沖液平衡好的sephacyl s-100hr柱，洗脫，洗脫流速為15ml／h，分部收集洗脫峰，2ml／管。合并光吸收高峰管。5. 透析濃縮用含50％甘油的0.1mol/l 磷酸鹽緩沖液，ph 7.0透析濃縮4h，－20℃分裝凍存?zhèn)溆谩?

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