GB 31659.4-2022 食品安全國家標準 奶及奶粉中阿維菌素類藥物殘留量的測定
中華人民共和國國家標準
gb 31659.4-2022
代替gb/t 22968-2008
食品安全國家標準
奶及奶粉中阿維菌素類藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法
national food safety standard-
determination of avermectins residues in milk and milk powder
by liquid chromatography-tandem mass spectrometric method
前言
本文件按照gb/t 1.1-2020《 標準化工作導則第 1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。
本文件代替gb/t 22968-2008《牛奶和奶粉中伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法》，與gb/t 22968-2008 相比，除結構調整和編輯性改動外，主要變化如下：
——標準文本格式修改為食品安全國家標準文本格式；
——標準范圍中增加了羊奶的檢測；
——標準測定物質改為各藥物的殘留標志物；
——標準靈敏度進一步提高。
本文件及其所代替文件的歷次版本發布情況為：
——gb/t 22968-2008。
1范圍
本文件規定了奶及奶粉中阿維菌素類藥物殘留檢測的制樣和液相色譜-串聯質譜測定方法。
本文件適用于牛奶、羊奶和奶粉中阿維菌素（以阿維菌素b1a計）、伊維菌素（以22，23-二氫阿維菌素b1a計）、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素（以乙酰氨基阿維菌素b1a計）單個或多個藥物的殘留檢測。
2規范性引用文件
下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
gb/t 6682分析實驗室用水規格和試驗方法
3術語和定義
本文件沒有需要界定的術語和定義。
4原理
試料中殘留的阿維菌素類藥物，用乙腈提取，c18固相萃取柱凈化，液相色譜-串聯質譜測定，基質匹配標準溶液外標法定量。
5試劑和材料
5.1試劑
以下所用試劑，除特別注明外均為分析純試劑，水為符合gb/t 6682規定的一級水。
5.1.1 乙腈（ch3cn）：色譜純。
5.1.2 甲醇（ch3oh）：色譜純。
5. 1.3 甲酸（ch2o2）：色譜純。
5.1.4三乙胺（c6h15n）。
5.1.5 異辛烷（c8h18）。
5.2 溶液配制
5.2.1 0.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸1 ml，用乙腈稀釋至1 000 ml。
5.2.2 0.1%甲酸溶液：取甲酸1 ml，用水稀釋至1 000 ml。
5.2.3淋洗溶液：取乙腈30 ml、水70 ml和三乙胺20 μl，混勻。
5.2.4 50%乙腈溶液：取乙腈50 ml，用水稀釋至100 ml。
5.3 標準品
阿維菌素（avermectin，c48h72o14·c47h70o14，cas號：71751-41-2），含量≥98.0%；伊維菌素（iver-mectin，c48h74o14，cas號：70288-86-7），含量≥98.0%；多拉菌素（doramectin，c50h74o14，cas號：117704-25-3），含量≥94.3%；乙酰氨基阿維菌素（eprinomectin，c50h75no14，cas號：123997-26-2），含量≥98.0%。
5.4 標準溶液的制備
5.4.1 阿維菌素類藥物標準儲備液：精密稱取阿維菌素（以阿維菌素b1a計）、伊維菌素（以22，23-二氫阿維菌素b1a計）、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素（以乙酰氨基阿維菌素b1a計）標準品各約10mg，于不同的10 ml容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，配制成濃度為1 mg/ml的阿維菌素b1a、22 ，23-二氫阿維菌素b1a、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素b1a標準儲備液。-18℃以下保存，有效期12個月。
5.4.2 阿維菌素類藥物標準工作液：精密量取1 mg/ml的阿維菌素b1a、22，23-二氫阿維菌素b1a、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素b1a標準儲備液100 μl，于不同的10 ml容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，配制成濃度為10 μg/ml的阿維菌素b1a、22，23-二氫阿維菌素b1a、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素b1a標準工作液。-18℃以下保存，有效期6個月。
5.5 材料
5.5.1 c18固相萃取柱：500 mg/6 ml，或相當者。
5.5.2親水聚四氟乙烯微孔濾膜：0.22μm。
6儀器和設備
6.1液相色譜-串聯質譜儀：配有電噴霧離子源（esi）。
6.2 分析天平：感量0.00001 g和0.01 g。
6.3 渦旋混合器。
6.4高速離心機。
6.5 氮吹儀。
6.6 水平振蕩器。
7試樣的制備與保存
7.1試樣的制備
取適量新鮮或解凍的空白或供試牛奶或羊奶及奶粉，混合均勻。
a）取均質后的供試樣品，作為供試試樣；
b）取均質后的空白樣品，作為空白試樣；
c）取均質后的空白樣品，添加適宜濃度的標準工作液，作為空白添加試樣。
7.2 試樣的保存
牛奶和羊奶：冷藏避光或-18℃以下保存。
奶粉：陰涼干燥處保存。
8測定步驟
8.1提取
稱取牛奶或羊奶2 g（準確至±0.05 g）或奶粉0.5 g（準確至±0.01 g）于50 ml離心管中，加乙腈8 ml，渦旋后200 r/min水平振蕩5 min，8 000 r/min離心8 min，轉移上清液至另一50 ml離心管中，加水10 ml、三乙胺25 μl，混勻，備用。
8.2凈化與濃縮
c18固相萃取柱依次用乙腈5 ml和淋洗溶液5 ml活化，取備用液過柱，用淋洗溶液5 ml淋洗，抽干；再用異辛烷5 ml淋洗，抽干；用乙腈5 ml洗脫，收集洗脫液于10 ml試管中，于50℃下氮氣吹干。殘余物中加入50%乙腈溶液1.0 ml，充分溶解。過微孔濾膜后供液相色譜-串聯質譜儀測定。
8.3基質匹配標準曲線的制備
精密量取阿維菌素類標準工作液適量，用50%乙腈水溶液稀釋成含阿維菌素b1a、22，23-二氫阿維菌素b1a、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素b1a濃度分別為0.5 ng/ml、1 ng/ml、2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml 和400 ng/ml 的系列標準工作液（牛奶或羊奶用0.5 ng/ml、1 ng/ml、2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml和50 ng/ml濃度點，奶粉用2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml和400 ng/ml濃度點），從中各取1.0 ml，分別加入空白試料經提取、凈化和吹干后的殘余物中，充分溶解，作為基質匹配標準溶液，過微孔濾膜后上機測定。以特征離子質量色譜峰面積為縱坐標、基質匹配標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
8.4 測定
8.4.1 液相色譜參考條件
a）色譜柱：c18（50 mm×2.1mm，1.7μm），或性能相當者。
b）流動相：a為0.1%甲酸溶液，b為0.1%甲酸乙腈溶液。流動相梯度：0 min~1 min保持70% b；1 min~3 min，70%b線性變化到100%b；3 min~4 min保持100%b；4 min~6 min保持70% b。
c）流速：0.4 ml/min。
d）進樣量：5 μl。
e）柱溫：30℃。
8.4.2串聯質譜參考條件
a）離子源：電噴霧離子源；
b）掃描方式：正離子掃描；
c）檢測方式：多反應離子監測（mrm）；
d）電噴霧電壓：5 500 v；
e）離子源溫度：500℃；
f）輔助氣1：50 psi；
g）輔助氣2：50 psi；
h）氣簾氣：30 psi；
i）碰撞氣：medium。
j）待測藥物定性、定量離子對和對應的去簇電壓、碰撞能量參考值見表1。
8.4.3 測定法
試樣溶液的保留時間在基質匹配標準溶液保留時間的±2.5%之內。試樣溶液中的離子相對豐度與基質匹配標準溶液中的離子相對豐度相比，符合表2的要求。
取基質匹配標準溶液和試樣溶液，作單點或多點校準，按外標法，以峰面積計算。基質匹配標準溶液及試樣溶液中阿維菌素類藥物的峰面積均應在儀器檢測的線性范圍之內，超出線性范圍時進行適當倍數稀釋后再進行分析。基質匹配標準溶液中特征離子質量色譜圖見附錄a。
表2試樣溶液中離子相對豐度的允許偏差范圍
單位為百分號
相對豐度
允許偏差
＞50
±20
＞20~50
±25
＞10~20
±30
≤10
±50
8.5空白試驗
取空白試料，除不添加藥物外，采用完全相同的測定步驟進行平行操作。
9結果計算和表述
試樣中阿維菌素類藥物的殘留量按標準曲線或公式（1）計算。
式中：
x——試樣中阿維菌素類藥物殘留量的數值，單位為微克每千克（μg/kg）；
c——基質匹配標準溶液中阿維菌素類藥物濃度的數值，單位為納克每毫升（ng/ml）；
a——試樣溶液中阿維菌素類藥物的峰面積；
v——溶解殘余物所用溶液體積的數值，單位為毫升（ml）；
as——基質匹配標準溶液中阿維菌素類藥物的峰面積；
m——試樣質量的數值，單位為克（g）。
10 檢測方法的靈敏度、準確度和精密度
10.1靈敏度
本方法對牛奶或羊奶的檢測限為0.2 μg/kg，定量限為0.5 μg/kg；對奶粉的檢測限為1μg/kg，定量限為4 μg/kg。
10.2 準確度
本方法牛奶中阿維菌素b1a 在0.5 μg/kg~5 μg/kg、22，23-二氫阿維菌素b1a 在0.5 μg/kg~20 μg/kg、多拉菌素在0.5 μg/kg~ 30 μg/kg、乙酰氨基阿維菌素b1a在0.5 μg/kg~40 μg/kg添加濃度水平上，羊奶中阿維菌素類藥物在0.5 μg/kg~5 μg/kg添加濃度水平上，以及奶粉中阿維菌素b1a在4 μg/kg~40 μg/kg、22，23-二氫阿維菌素b1a在4 μg/kg~160 μg/kg、多拉菌素在4 μg/kg~ 240 μg/kg、乙酰氨基阿維菌素b1a在4 μg/kg~320 μg/kg添加濃度水平上的回收率均為60%~ 120%。
10.3 精密度
本方法批內相對標準偏差≤15%，批間相對標準偏差≤20%。
不銹鋼倒流防止器DF41X不銹鋼一體式倒流防止器防污倒流閥安裝位置
粘度計——旋轉粘度計的使用常識
防止水族養魚蛋白棉樹脂發生鐵污染的措施
全自動數控車床如何的選擇考慮到及其維護保養
去離子水設備在操作中都會遇到哪些常見問題？
GB 31659.4-2022 食品安全國家標準 奶及奶粉中阿維菌素類藥物殘留量的測定
屠宰廢水處理設備未來發展趨勢
美國光譜醫學透析袋 132665 MD50 6-8KD 分子量 1米
磁性翻板液位計使用時注意事項
請注意德國KUBLER庫伯勒滑環磨損的粉末可能造成環與環之間的短路
磁測量常用專業術語總結和磁性能參數對應的磁測量儀器
自清洗過濾器是如何實施自動化過濾？
Q615F氣動內螺紋T型三通球閥之產品特點及其附件選項
浙江包子機,杭州包子機,寧波包子機
車輛用零部件涂料如何判定低揮發性有機化合物
激光粒度儀折射率問題的計算、分析
生活污水處理效果好的原因是什么
泡沫模具烘干設備 烘干快更節能
DANFOSS液壓馬達OMT 200 151B3001特點介紹
高精度無心磨床的作用
gb 31659.4-2022
代替gb/t 22968-2008
食品安全國家標準
奶及奶粉中阿維菌素類藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法
national food safety standard-
determination of avermectins residues in milk and milk powder
by liquid chromatography-tandem mass spectrometric method
前言
本文件按照gb/t 1.1-2020《 標準化工作導則第 1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。
本文件代替gb/t 22968-2008《牛奶和奶粉中伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法》，與gb/t 22968-2008 相比，除結構調整和編輯性改動外，主要變化如下：
——標準文本格式修改為食品安全國家標準文本格式；
——標準范圍中增加了羊奶的檢測；
——標準測定物質改為各藥物的殘留標志物；
——標準靈敏度進一步提高。
本文件及其所代替文件的歷次版本發布情況為：
——gb/t 22968-2008。
1范圍
本文件規定了奶及奶粉中阿維菌素類藥物殘留檢測的制樣和液相色譜-串聯質譜測定方法。
本文件適用于牛奶、羊奶和奶粉中阿維菌素（以阿維菌素b1a計）、伊維菌素（以22，23-二氫阿維菌素b1a計）、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素（以乙酰氨基阿維菌素b1a計）單個或多個藥物的殘留檢測。
2規范性引用文件
下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
gb/t 6682分析實驗室用水規格和試驗方法
3術語和定義
本文件沒有需要界定的術語和定義。
4原理
試料中殘留的阿維菌素類藥物，用乙腈提取，c18固相萃取柱凈化，液相色譜-串聯質譜測定，基質匹配標準溶液外標法定量。
5試劑和材料
5.1試劑
以下所用試劑，除特別注明外均為分析純試劑，水為符合gb/t 6682規定的一級水。
5.1.1 乙腈（ch3cn）：色譜純。
5.1.2 甲醇（ch3oh）：色譜純。
5. 1.3 甲酸（ch2o2）：色譜純。
5.1.4三乙胺（c6h15n）。
5.1.5 異辛烷（c8h18）。
5.2 溶液配制
5.2.1 0.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸1 ml，用乙腈稀釋至1 000 ml。
5.2.2 0.1%甲酸溶液：取甲酸1 ml，用水稀釋至1 000 ml。
5.2.3淋洗溶液：取乙腈30 ml、水70 ml和三乙胺20 μl，混勻。
5.2.4 50%乙腈溶液：取乙腈50 ml，用水稀釋至100 ml。
5.3 標準品
阿維菌素（avermectin，c48h72o14·c47h70o14，cas號：71751-41-2），含量≥98.0%；伊維菌素（iver-mectin，c48h74o14，cas號：70288-86-7），含量≥98.0%；多拉菌素（doramectin，c50h74o14，cas號：117704-25-3），含量≥94.3%；乙酰氨基阿維菌素（eprinomectin，c50h75no14，cas號：123997-26-2），含量≥98.0%。
5.4 標準溶液的制備
5.4.1 阿維菌素類藥物標準儲備液：精密稱取阿維菌素（以阿維菌素b1a計）、伊維菌素（以22，23-二氫阿維菌素b1a計）、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素（以乙酰氨基阿維菌素b1a計）標準品各約10mg，于不同的10 ml容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，配制成濃度為1 mg/ml的阿維菌素b1a、22 ，23-二氫阿維菌素b1a、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素b1a標準儲備液。-18℃以下保存，有效期12個月。
5.4.2 阿維菌素類藥物標準工作液：精密量取1 mg/ml的阿維菌素b1a、22，23-二氫阿維菌素b1a、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素b1a標準儲備液100 μl，于不同的10 ml容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，配制成濃度為10 μg/ml的阿維菌素b1a、22，23-二氫阿維菌素b1a、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素b1a標準工作液。-18℃以下保存，有效期6個月。
5.5 材料
5.5.1 c18固相萃取柱：500 mg/6 ml，或相當者。
5.5.2親水聚四氟乙烯微孔濾膜：0.22μm。
6儀器和設備
6.1液相色譜-串聯質譜儀：配有電噴霧離子源（esi）。
6.2 分析天平：感量0.00001 g和0.01 g。
6.3 渦旋混合器。
6.4高速離心機。
6.5 氮吹儀。
6.6 水平振蕩器。
7試樣的制備與保存
7.1試樣的制備
取適量新鮮或解凍的空白或供試牛奶或羊奶及奶粉，混合均勻。
a）取均質后的供試樣品，作為供試試樣；
b）取均質后的空白樣品，作為空白試樣；
c）取均質后的空白樣品，添加適宜濃度的標準工作液，作為空白添加試樣。
7.2 試樣的保存
牛奶和羊奶：冷藏避光或-18℃以下保存。
奶粉：陰涼干燥處保存。
8測定步驟
8.1提取
稱取牛奶或羊奶2 g（準確至±0.05 g）或奶粉0.5 g（準確至±0.01 g）于50 ml離心管中，加乙腈8 ml，渦旋后200 r/min水平振蕩5 min，8 000 r/min離心8 min，轉移上清液至另一50 ml離心管中，加水10 ml、三乙胺25 μl，混勻，備用。
8.2凈化與濃縮
c18固相萃取柱依次用乙腈5 ml和淋洗溶液5 ml活化，取備用液過柱，用淋洗溶液5 ml淋洗，抽干；再用異辛烷5 ml淋洗，抽干；用乙腈5 ml洗脫，收集洗脫液于10 ml試管中，于50℃下氮氣吹干。殘余物中加入50%乙腈溶液1.0 ml，充分溶解。過微孔濾膜后供液相色譜-串聯質譜儀測定。
8.3基質匹配標準曲線的制備
精密量取阿維菌素類標準工作液適量，用50%乙腈水溶液稀釋成含阿維菌素b1a、22，23-二氫阿維菌素b1a、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素b1a濃度分別為0.5 ng/ml、1 ng/ml、2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml 和400 ng/ml 的系列標準工作液（牛奶或羊奶用0.5 ng/ml、1 ng/ml、2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml和50 ng/ml濃度點，奶粉用2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml和400 ng/ml濃度點），從中各取1.0 ml，分別加入空白試料經提取、凈化和吹干后的殘余物中，充分溶解，作為基質匹配標準溶液，過微孔濾膜后上機測定。以特征離子質量色譜峰面積為縱坐標、基質匹配標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
8.4 測定
8.4.1 液相色譜參考條件
a）色譜柱：c18（50 mm×2.1mm，1.7μm），或性能相當者。
b）流動相：a為0.1%甲酸溶液，b為0.1%甲酸乙腈溶液。流動相梯度：0 min~1 min保持70% b；1 min~3 min，70%b線性變化到100%b；3 min~4 min保持100%b；4 min~6 min保持70% b。
c）流速：0.4 ml/min。
d）進樣量：5 μl。
e）柱溫：30℃。
8.4.2串聯質譜參考條件
a）離子源：電噴霧離子源；
b）掃描方式：正離子掃描；
c）檢測方式：多反應離子監測（mrm）；
d）電噴霧電壓：5 500 v；
e）離子源溫度：500℃；
f）輔助氣1：50 psi；
g）輔助氣2：50 psi；
h）氣簾氣：30 psi；
i）碰撞氣：medium。
j）待測藥物定性、定量離子對和對應的去簇電壓、碰撞能量參考值見表1。
8.4.3 測定法
試樣溶液的保留時間在基質匹配標準溶液保留時間的±2.5%之內。試樣溶液中的離子相對豐度與基質匹配標準溶液中的離子相對豐度相比，符合表2的要求。
取基質匹配標準溶液和試樣溶液，作單點或多點校準，按外標法，以峰面積計算。基質匹配標準溶液及試樣溶液中阿維菌素類藥物的峰面積均應在儀器檢測的線性范圍之內，超出線性范圍時進行適當倍數稀釋后再進行分析。基質匹配標準溶液中特征離子質量色譜圖見附錄a。
表2試樣溶液中離子相對豐度的允許偏差范圍
單位為百分號
相對豐度
允許偏差
＞50
±20
＞20~50
±25
＞10~20
±30
≤10
±50
8.5空白試驗
取空白試料，除不添加藥物外，采用完全相同的測定步驟進行平行操作。
9結果計算和表述
試樣中阿維菌素類藥物的殘留量按標準曲線或公式（1）計算。
式中：
x——試樣中阿維菌素類藥物殘留量的數值，單位為微克每千克（μg/kg）；
c——基質匹配標準溶液中阿維菌素類藥物濃度的數值，單位為納克每毫升（ng/ml）；
a——試樣溶液中阿維菌素類藥物的峰面積；
v——溶解殘余物所用溶液體積的數值，單位為毫升（ml）；
as——基質匹配標準溶液中阿維菌素類藥物的峰面積；
m——試樣質量的數值，單位為克（g）。
10 檢測方法的靈敏度、準確度和精密度
10.1靈敏度
本方法對牛奶或羊奶的檢測限為0.2 μg/kg，定量限為0.5 μg/kg；對奶粉的檢測限為1μg/kg，定量限為4 μg/kg。
10.2 準確度
本方法牛奶中阿維菌素b1a 在0.5 μg/kg~5 μg/kg、22，23-二氫阿維菌素b1a 在0.5 μg/kg~20 μg/kg、多拉菌素在0.5 μg/kg~ 30 μg/kg、乙酰氨基阿維菌素b1a在0.5 μg/kg~40 μg/kg添加濃度水平上，羊奶中阿維菌素類藥物在0.5 μg/kg~5 μg/kg添加濃度水平上，以及奶粉中阿維菌素b1a在4 μg/kg~40 μg/kg、22，23-二氫阿維菌素b1a在4 μg/kg~160 μg/kg、多拉菌素在4 μg/kg~ 240 μg/kg、乙酰氨基阿維菌素b1a在4 μg/kg~320 μg/kg添加濃度水平上的回收率均為60%~ 120%。
10.3 精密度
本方法批內相對標準偏差≤15%，批間相對標準偏差≤20%。
不銹鋼倒流防止器DF41X不銹鋼一體式倒流防止器防污倒流閥安裝位置
粘度計——旋轉粘度計的使用常識
防止水族養魚蛋白棉樹脂發生鐵污染的措施
全自動數控車床如何的選擇考慮到及其維護保養
去離子水設備在操作中都會遇到哪些常見問題？
GB 31659.4-2022 食品安全國家標準 奶及奶粉中阿維菌素類藥物殘留量的測定
屠宰廢水處理設備未來發展趨勢
美國光譜醫學透析袋 132665 MD50 6-8KD 分子量 1米
磁性翻板液位計使用時注意事項
請注意德國KUBLER庫伯勒滑環磨損的粉末可能造成環與環之間的短路
磁測量常用專業術語總結和磁性能參數對應的磁測量儀器
自清洗過濾器是如何實施自動化過濾？
Q615F氣動內螺紋T型三通球閥之產品特點及其附件選項
浙江包子機,杭州包子機,寧波包子機
車輛用零部件涂料如何判定低揮發性有機化合物
激光粒度儀折射率問題的計算、分析
生活污水處理效果好的原因是什么
泡沫模具烘干設備 烘干快更節能
DANFOSS液壓馬達OMT 200 151B3001特點介紹
高精度無心磨床的作用