多重熒光免疫組化Q&A——第三彈
q：我該如何得到wan美的多色結果呢？
a：首先，您需要有質量不錯的樣本和抗體，這就已經是成功的一半（樣本、抗體選擇攻略），對于樣本來說，脫片是我們需要預防的“頭號公敵”，多色實驗需要重復熱修復洗脫抗體多次，假如片子脫片，輕則成像模糊，重則組織脫落前功盡棄，可以在開始實驗之前先模擬幾輪熱修復，不加抗體和其他試劑，看看組織是否有脫落的跡象，如果脫落比較嚴重，則需要重新制備切片，如果有輕微脫片，則可以考慮購買抗體洗脫液（abs994），替代熱修復的過程；然后，就可以開始做實驗了，我們建議您先進行抗體和染料工作條件摸索，再上多染（參考下圖流程），這樣多染的成功率可以達到90%以上哦！（小愛經驗之談，即便是染了千百遍的常見指標，換個樣本，染色效果就可能天差地別，有條件還是建議要做預實驗）
最后的10%，就需要調整指標與染料搭配以及染色的順序了。
q：有沒有推薦的染料搭配和染色順序呢？
a：染料搭配一般遵循“寡靶配強光，眾靶配弱光”的原則，意思是表達比較弱的指標搭配熒光信號比較強的染料，表達相對強的指標搭配信號比較弱的染料，absin的tsa染料波長越短熒光強度越強，比如說需要染pd-1，cd8和cd3，我們手里有一個四色試劑盒（tsa520/tsa570/tsa650），通過ihc發現樣本中pd-1的信號很少，cd3信號非常多，其次是cd8，于是選擇tsa520搭配pd-1，tsa650搭配cd3，tsa570搭配cd8，比較合理。
接下來就是怎么安排染色先后順序：①劃分細胞定位，先外后內：確定每個指標的細胞定位，膜表達先染，胞漿或者胞核的后染（如果是指標比較多的情況下，胞內指標排在比較后面，經過前期多輪洗脫，可以不做細胞通透；如果指標很少，染胞內指標之前還是需要打孔，多個胞內指標也只需要打一次孔）；②確定抗原修復方式，先酸后堿：堿修復比酸修復的力度會更強，個別抗體在用堿修復以后會染出來很多非特異性，所以如果是相同的細胞定位，就先染酸修復，再染堿修復的抗體；③根據ihc結果判別，先弱后強：組化結果顯示指標比較少，比較弱的，排在前面染，理論上來說越靠前染的指標效果會越接近單標染色。
以上就是一些通用規則，但不同的指標還是可能出現變化，要想得到wan美的結果，就需要不同的排列組合一個一個嘗試（如下表，“x”代表有信號），這樣會比較耗費時間和試劑，您可以根據通用規則先行一次多染，然后各通道跟熒光單染做對比，如果效果差別很大，那就再調整染色順序，如果單染的結果跟組化差別比較大（出現高背景，非特異性明顯），就要考慮更換染料搭配。
q：我成像完了以后想要做數據分析，你們有什么軟件推薦嗎？
a：目前市面上數據分析軟件還是比較多的，像免費的您可以下載imagej、qupath，缺點就是用法都需要您自行摸索；我們公司安裝的是halo和strataquest兩款軟件，halo是付費的，strataquest是我們tg的掃描儀平臺自帶的，從功能、分析的精準度和可操作性來說，肯定是大大優于開源軟件的，且有軟件專業的技術支持團隊能夠答疑解惑。您可以根據您的實際情況選擇合適的分析軟件，如果您實在無從下手，也可以找absin，我們可以提供數據分析的服務~
勞動月重磅福利！
多色試劑盒8折！
↓↓↓折上還送豪禮！↓↓↓
買 20t 試劑盒送2瓶一抗二抗稀釋液（abs9299-100ml）；
↓↓↓買 100t 試劑盒送1支50ul 人用病理抗體！↓↓↓
absin病理抗體指標大全：
cd相關抗體：cd3、cd8a、cd4、cd68、cd206、cd163、cd20、cd19、cd45、cd56、cd10、cd117、cd138、cd14、cd146、cd15、cd1a、cd2、cd21、cd23、cd25、cd30、cd31、cd34、cd35、cd38、cd3g、cd44、cd5、cd7、cd79a、cd79b、cd99
角蛋白（ck）相關抗體：panck、ck-4、ck hmw、ck-1、ck-10、ck-14、ck-17、ck-18、ck-19、ck-20、ck-5、ck-5&6、ck-6、ck-7、ck-8、ck-8&18
癌癥腫瘤相關：p120、p16、p21、p40、p53、p63、afp、alk、amacr、anxa1、aurora-b、bcl-6、ctnnb1、ca125、cdk4、cdx2、cea、ccnd1、c-met、c-myc、dog1、cdh1、egfr、epcam、erg、ezh2、fabp3、fgfr2、foxp1、gata-3、gcdfp-15、gpc3、gzmb、her-2、idh1 r132h、ki-67、ldlr、mcm7、mcm3、mgmt、msh2、msh6、muc1、muc2、muc4、mum1、myod1、myogenin、myosin (smooth muscle)、napsin-a、n-cadherin、olig2、pax-2、pax-5、pax-8、pct、pd-1、phh3、plap、pmel-17、pdpn、pr、psa、psap、s100a1、s100p、sall4、satb1、sf-1、sox10、sox11、sox2、stat6、stathmin、tcl1、tfe3、tg、tle1、top2a、tpo、trps1、ttf-1、type i cytokeratins、type ii cytokeratins、uroplakin iii、villin、wt1、zap-70
神經相關：atrx、p75 ngf receptor、cga、ddx4、gfap、λlight chains、mbp、neun、neurofilament、nse、olig2、p75 ngf receptor、s100、syp
血管：ace2、vegf、vwf
鈣蛋白：calb1、caldesmon、calponin、calcitonin、calprotectin
其他：mpo、ar、arg-1、ar-v7、b2m、cldn1、collagen type ⅳ、col4a5、erα、gh、hbsag、hcg、hcg-beta、hpl、igd、igg、igm、igfbp3、insulin、oct3/4、scgn、somatostatin、tdt、actin、desmin
上海優寧維生物科技股份有限公司
試劑 | 耗材 | 儀器 | 軟件 | 定制 | 實驗服務 | 供應鏈
微信公眾平臺：優寧維抗體專家，歡迎關注！
小優博士（小程序）：5大課堂, 讓你的科研不再難！
PZ973H電動刀閘閥結構參數
德國西門子壓力變送器常見故障和處理方法
山東超聲波焊接機什么價格？售后服務怎么樣
食品安全綜合分析儀的功能介紹
如何使用彎管機節約成本
多重熒光免疫組化Q&A——第三彈
的 ICP-OES 光學設計帶來的分析速度和性能
棗莊設備罐體鐵板保溫施工隊
什么是氣候老化？昆山宏展儀器教您-老化的主要因素有哪些？
304不銹鋼電子秤使用常識
人臉識別攻占各行各業 三方面引人擔憂
木工雕刻機雕刻方式 雕刻機不同刀具雕刻方式
藥用玻璃瓶容器耐內壓力機檢測玻璃瓶內壓力方法
宜興西門子變頻器價格中心
RTC屋頂排煙風機的主要部件和安裝方法步驟
為什么養殖以及食品等行業誰選擇MBR膜工藝？
實驗室高溫電爐大學科研現貨供應
防爆液位控制箱結構組成介紹
西門子PLC上海一級代理商
年前關機與保存，月旭科技為您暖心奉上
a：首先，您需要有質量不錯的樣本和抗體，這就已經是成功的一半（樣本、抗體選擇攻略），對于樣本來說，脫片是我們需要預防的“頭號公敵”，多色實驗需要重復熱修復洗脫抗體多次，假如片子脫片，輕則成像模糊，重則組織脫落前功盡棄，可以在開始實驗之前先模擬幾輪熱修復，不加抗體和其他試劑，看看組織是否有脫落的跡象，如果脫落比較嚴重，則需要重新制備切片，如果有輕微脫片，則可以考慮購買抗體洗脫液（abs994），替代熱修復的過程；然后，就可以開始做實驗了，我們建議您先進行抗體和染料工作條件摸索，再上多染（參考下圖流程），這樣多染的成功率可以達到90%以上哦！（小愛經驗之談，即便是染了千百遍的常見指標，換個樣本，染色效果就可能天差地別，有條件還是建議要做預實驗）
最后的10%，就需要調整指標與染料搭配以及染色的順序了。
q：有沒有推薦的染料搭配和染色順序呢？
a：染料搭配一般遵循“寡靶配強光，眾靶配弱光”的原則，意思是表達比較弱的指標搭配熒光信號比較強的染料，表達相對強的指標搭配信號比較弱的染料，absin的tsa染料波長越短熒光強度越強，比如說需要染pd-1，cd8和cd3，我們手里有一個四色試劑盒（tsa520/tsa570/tsa650），通過ihc發現樣本中pd-1的信號很少，cd3信號非常多，其次是cd8，于是選擇tsa520搭配pd-1，tsa650搭配cd3，tsa570搭配cd8，比較合理。
接下來就是怎么安排染色先后順序：①劃分細胞定位，先外后內：確定每個指標的細胞定位，膜表達先染，胞漿或者胞核的后染（如果是指標比較多的情況下，胞內指標排在比較后面，經過前期多輪洗脫，可以不做細胞通透；如果指標很少，染胞內指標之前還是需要打孔，多個胞內指標也只需要打一次孔）；②確定抗原修復方式，先酸后堿：堿修復比酸修復的力度會更強，個別抗體在用堿修復以后會染出來很多非特異性，所以如果是相同的細胞定位，就先染酸修復，再染堿修復的抗體；③根據ihc結果判別，先弱后強：組化結果顯示指標比較少，比較弱的，排在前面染，理論上來說越靠前染的指標效果會越接近單標染色。
以上就是一些通用規則，但不同的指標還是可能出現變化，要想得到wan美的結果，就需要不同的排列組合一個一個嘗試（如下表，“x”代表有信號），這樣會比較耗費時間和試劑，您可以根據通用規則先行一次多染，然后各通道跟熒光單染做對比，如果效果差別很大，那就再調整染色順序，如果單染的結果跟組化差別比較大（出現高背景，非特異性明顯），就要考慮更換染料搭配。
q：我成像完了以后想要做數據分析，你們有什么軟件推薦嗎？
a：目前市面上數據分析軟件還是比較多的，像免費的您可以下載imagej、qupath，缺點就是用法都需要您自行摸索；我們公司安裝的是halo和strataquest兩款軟件，halo是付費的，strataquest是我們tg的掃描儀平臺自帶的，從功能、分析的精準度和可操作性來說，肯定是大大優于開源軟件的，且有軟件專業的技術支持團隊能夠答疑解惑。您可以根據您的實際情況選擇合適的分析軟件，如果您實在無從下手，也可以找absin，我們可以提供數據分析的服務~
勞動月重磅福利！
多色試劑盒8折！
↓↓↓折上還送豪禮！↓↓↓
買 20t 試劑盒送2瓶一抗二抗稀釋液（abs9299-100ml）；
↓↓↓買 100t 試劑盒送1支50ul 人用病理抗體！↓↓↓
absin病理抗體指標大全：
cd相關抗體：cd3、cd8a、cd4、cd68、cd206、cd163、cd20、cd19、cd45、cd56、cd10、cd117、cd138、cd14、cd146、cd15、cd1a、cd2、cd21、cd23、cd25、cd30、cd31、cd34、cd35、cd38、cd3g、cd44、cd5、cd7、cd79a、cd79b、cd99
角蛋白（ck）相關抗體：panck、ck-4、ck hmw、ck-1、ck-10、ck-14、ck-17、ck-18、ck-19、ck-20、ck-5、ck-5&6、ck-6、ck-7、ck-8、ck-8&18
癌癥腫瘤相關：p120、p16、p21、p40、p53、p63、afp、alk、amacr、anxa1、aurora-b、bcl-6、ctnnb1、ca125、cdk4、cdx2、cea、ccnd1、c-met、c-myc、dog1、cdh1、egfr、epcam、erg、ezh2、fabp3、fgfr2、foxp1、gata-3、gcdfp-15、gpc3、gzmb、her-2、idh1 r132h、ki-67、ldlr、mcm7、mcm3、mgmt、msh2、msh6、muc1、muc2、muc4、mum1、myod1、myogenin、myosin (smooth muscle)、napsin-a、n-cadherin、olig2、pax-2、pax-5、pax-8、pct、pd-1、phh3、plap、pmel-17、pdpn、pr、psa、psap、s100a1、s100p、sall4、satb1、sf-1、sox10、sox11、sox2、stat6、stathmin、tcl1、tfe3、tg、tle1、top2a、tpo、trps1、ttf-1、type i cytokeratins、type ii cytokeratins、uroplakin iii、villin、wt1、zap-70
神經相關：atrx、p75 ngf receptor、cga、ddx4、gfap、λlight chains、mbp、neun、neurofilament、nse、olig2、p75 ngf receptor、s100、syp
血管：ace2、vegf、vwf
鈣蛋白：calb1、caldesmon、calponin、calcitonin、calprotectin
其他：mpo、ar、arg-1、ar-v7、b2m、cldn1、collagen type ⅳ、col4a5、erα、gh、hbsag、hcg、hcg-beta、hpl、igd、igg、igm、igfbp3、insulin、oct3/4、scgn、somatostatin、tdt、actin、desmin
上海優寧維生物科技股份有限公司
試劑 | 耗材 | 儀器 | 軟件 | 定制 | 實驗服務 | 供應鏈
微信公眾平臺：優寧維抗體專家，歡迎關注！
小優博士（小程序）：5大課堂, 讓你的科研不再難！
PZ973H電動刀閘閥結構參數
德國西門子壓力變送器常見故障和處理方法
山東超聲波焊接機什么價格？售后服務怎么樣
食品安全綜合分析儀的功能介紹
如何使用彎管機節約成本
多重熒光免疫組化Q&A——第三彈
的 ICP-OES 光學設計帶來的分析速度和性能
棗莊設備罐體鐵板保溫施工隊
什么是氣候老化？昆山宏展儀器教您-老化的主要因素有哪些？
304不銹鋼電子秤使用常識
人臉識別攻占各行各業 三方面引人擔憂
木工雕刻機雕刻方式 雕刻機不同刀具雕刻方式
藥用玻璃瓶容器耐內壓力機檢測玻璃瓶內壓力方法
宜興西門子變頻器價格中心
RTC屋頂排煙風機的主要部件和安裝方法步驟
為什么養殖以及食品等行業誰選擇MBR膜工藝？
實驗室高溫電爐大學科研現貨供應
防爆液位控制箱結構組成介紹
西門子PLC上海一級代理商
年前關機與保存，月旭科技為您暖心奉上