核酸的定量是分光光度計使用頻率很高的功能?？梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈dna，以及rna。
核酸的高吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對應的系數(shù)。如：1od 的吸光值分別相當于50μg/ml的dsdna，37μg/ml的ssdna，40μg/ml的rna，30μg/ml的olig。
測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算，從而得出相應的樣品濃度。測試前，選擇正確的程序，輸入原液和稀釋液的體積，爾后測試空白液和樣品液。然而，實驗并非一帆風順。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實驗者最頭痛的問題。靈敏度越高的儀器，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。
事實上，分光光度計的設計原理和工作原理，允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化，即儀器有一定的準確度和精確度。
如eppendorf biophotometer的準確度≤1.0%(1a)。這樣多次測試的結(jié)果在均值1.0%左右之間變動，都是正常的。
另外，還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的ph值，離子濃度等：在測試時，離子濃度太高，也會導致讀數(shù)漂移如te，可大大穩(wěn)定讀數(shù)。
樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了大程度減少顆粒對測試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1a，吸光值在0.1-1.5a。
在此范圍內(nèi)混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物，否則讀數(shù)漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品，否則濃度差異太大;
換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致;不能采用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達到比色杯要求的小體積等多個操作事項。
除了核酸濃度，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度，如a260/a280的比值，用于評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品，比值大于1.8(dna)或者2.0(rna)。
如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。a230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽等，較純凈的核酸a260/a230的比值大于2.0。a320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，a320一般是0。
關(guān)鍵詞：分光光度計

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