由于石蠟切片標本多數使用甲醛固定,甲醛在組織中所形成的醛鍵、羧甲基等封閉了部分抗原決定簇,或由于蛋白分子之間的交聯而使抗原決定簇隱蔽。因此在染色前有些抗原需要*行抗原修復或暴露才能使組織中的抗原抗體充分結合,出現理想的染色結果。至于哪種抗原需要進行修復。需在建立染色程序時確定。常用的方法有加熱抗原修復法和酶消化法兩種。經大量試驗驗證.加熱抗原修復法優于酶消化法,其機制目前仍不清楚,可能是加熱打開了組織抗原因甲醛固定所引起的抗原決定簇的交聯,因此使免疫組織化學染色的敏感度大幅度提高。
(1)加熱修復法:加熱修復法分為高壓加熱修復法和微波修復法兩種:
①高壓加熱修復法:取一定量枸櫞酸鹽緩沖液(ph=6.0)于高壓鍋中,大火加熱直至沸騰。將脫蠟水化后的組織切片置于不銹鋼或耐高溫塑料切片架上,放人己沸騰的緩沖液中。蓋上鍋蓋,扣緊壓力閥,繼續加熱至噴汽。從噴汽開始計時.1~2分鐘后,高壓鍋離開熱源,冷卻至室溫(稍冷后,可在自來水籠頭下加速冷卻),取出玻片,先用蒸餾水沖洗2次,再用pbs沖洗2次,每次3分鐘。注意加熱時間長短的控制很重要,從組織切片放人緩沖液到高壓鍋離開火源的總時間控制在5―8分鐘為好.時間過長可能會使染色背景加深。緩沖液的量必須保證能浸泡到所有切片,用過的枸櫞酸緩沖液不能反復使用。
②微波修復法:取一定量ph 6.0枸櫞酸鹽緩沖液(緩沖液量不得小于500m1),于微波盒中,微波加熱直至沸騰,將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上。放人己沸騰的緩沖液中,中微波繼續處理15―20分鐘,取出微波盒冷卻至室溫,從緩沖液中取出玻片。先用蒸餾水沖洗2次,之后用pbs沖洗2次,每次3分鐘。
(2)*消化修復法:主要用于細胞內抗原的顯示。使用0.1%氯化鈣液(ph7.8)制成0.1%*液,37℃孵育切片15~30分鐘,之后用pbs洗滌3次,每次3分鐘。
(3)*消化修復方法:主要用于細胞間質抗原的顯示。一般使用濃度為0.4%,消化時間為37℃,30~180分鐘。
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