小鼠乳酸脫氫酶(LDH）ELISA試劑盒課題研究
小鼠乳酸脫氫酶(ldh）elisa試劑盒課題研究
小鼠乳酸脫氫酶(ldh）elisa試劑盒實驗原理
小鼠乳酸脫氫酶(ldh）elisa試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（elisa）。往預先包被小鼠乳酸脫氫酶(ldh）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、hrp標記的檢測抗體，經過溫育并徹di洗滌。用底物tmb顯色，tmb在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠乳酸脫氫酶(ldh）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（od 值），計算樣品濃度。
樣本處理及要求
1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：用edta或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿：用預冷的pbs (0.01m, ph=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的pbs（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9ml的pbs，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在pbs中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
4. 細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
需要而未提供的試劑盒器材
1.酶標儀（450nm）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
3.37℃恒溫箱
4.蒸餾水或去離子水
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標板
8孔×12條
8孔×6條
無
標準品
0.3ml*6管
0.3ml*6管
無
樣本稀釋液
6ml
3ml
無
檢測抗體-hrp
10ml
5ml
無
20×洗滌緩沖液
25ml
15ml
按說明書進行稀釋
底物a
6ml
3ml
無
底物b
6ml
3ml
無
終止液
6ml
3ml
無
封板膜
2張
2張
無
說明書
1份
1份
無
自封袋
1個
1個
無
備注：
1、標準品濃度依次為：詳見說明書；
2、經過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內，實驗過程中直接取50μl樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。
注意事項
1、嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2、洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3、消除板底殘留的液體和手指印，否則影響od值。
4、底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。
5、避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
6、在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7、平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8、任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
9、不能使用過期產品。
10、如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。
試劑準備
試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μl；
3.樣本孔中加入待測樣本50μl；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（hrp）標記的檢測抗體100μl，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μl），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物a、b各50μl，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μl，15min內，在450nm波長處測定各孔的od值。
實驗結果計算
以所測標準品的od值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的od值代入方程，計算出樣品的濃度。
試劑盒性能
1、檢測范圍：詳見產品說明書。
2、靈敏度：最di檢測濃度小于0.1 u/l。
3、特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4、重復性：板內變異系數小于10% ，板間變異系數小于15% 。
高光譜成像儀的優勢及受歡迎的主要原因
預防高壓清洗機進水腔密封失效的措施
壓片機在生產操作中的技巧
鋁材經plasma清洗所產生的等離子體能降低細菌黏附
多易拍文件拍攝儀機功能
小鼠乳酸脫氫酶(LDH）ELISA試劑盒課題研究
在線水質監測景區負氧離子檢測儀
看看五軸車銑復合機床這兩大主軸結構
河道清淤泵：保持河流清潔的關鍵設備
繪畫班一卡通管理系統 舞蹈室計時計次系統
食品學院實驗室廢水處理的正確途徑
100KN電子試驗機報價
KRACHT流量計中國總經銷
如何選擇機床導軌的潤滑油
三箱式冷熱沖擊試驗箱為各種產品和材料在瞬間變化的環境條件下的適應性設計
96孔板封膜儀在實驗室研究和診斷領域的應用與前景
山西聚丙乙烯纖維專業生產 質量保證
沙子烘干機的熱源
空調保溫管怎樣做保冷效果好
淺析漩渦氣泵溫度過高的原因
小鼠乳酸脫氫酶(ldh）elisa試劑盒實驗原理
小鼠乳酸脫氫酶(ldh）elisa試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（elisa）。往預先包被小鼠乳酸脫氫酶(ldh）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、hrp標記的檢測抗體，經過溫育并徹di洗滌。用底物tmb顯色，tmb在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠乳酸脫氫酶(ldh）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（od 值），計算樣品濃度。
樣本處理及要求
1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：用edta或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿：用預冷的pbs (0.01m, ph=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的pbs（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9ml的pbs，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在pbs中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
4. 細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
需要而未提供的試劑盒器材
1.酶標儀（450nm）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
3.37℃恒溫箱
4.蒸餾水或去離子水
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標板
8孔×12條
8孔×6條
無
標準品
0.3ml*6管
0.3ml*6管
無
樣本稀釋液
6ml
3ml
無
檢測抗體-hrp
10ml
5ml
無
20×洗滌緩沖液
25ml
15ml
按說明書進行稀釋
底物a
6ml
3ml
無
底物b
6ml
3ml
無
終止液
6ml
3ml
無
封板膜
2張
2張
無
說明書
1份
1份
無
自封袋
1個
1個
無
備注：
1、標準品濃度依次為：詳見說明書；
2、經過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內，實驗過程中直接取50μl樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。
注意事項
1、嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2、洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3、消除板底殘留的液體和手指印，否則影響od值。
4、底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。
5、避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
6、在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7、平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8、任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
9、不能使用過期產品。
10、如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。
試劑準備
試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μl；
3.樣本孔中加入待測樣本50μl；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（hrp）標記的檢測抗體100μl，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μl），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物a、b各50μl，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μl，15min內，在450nm波長處測定各孔的od值。
實驗結果計算
以所測標準品的od值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的od值代入方程，計算出樣品的濃度。
試劑盒性能
1、檢測范圍：詳見產品說明書。
2、靈敏度：最di檢測濃度小于0.1 u/l。
3、特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4、重復性：板內變異系數小于10% ，板間變異系數小于15% 。
高光譜成像儀的優勢及受歡迎的主要原因
預防高壓清洗機進水腔密封失效的措施
壓片機在生產操作中的技巧
鋁材經plasma清洗所產生的等離子體能降低細菌黏附
多易拍文件拍攝儀機功能
小鼠乳酸脫氫酶(LDH）ELISA試劑盒課題研究
在線水質監測景區負氧離子檢測儀
看看五軸車銑復合機床這兩大主軸結構
河道清淤泵：保持河流清潔的關鍵設備
繪畫班一卡通管理系統 舞蹈室計時計次系統
食品學院實驗室廢水處理的正確途徑
100KN電子試驗機報價
KRACHT流量計中國總經銷
如何選擇機床導軌的潤滑油
三箱式冷熱沖擊試驗箱為各種產品和材料在瞬間變化的環境條件下的適應性設計
96孔板封膜儀在實驗室研究和診斷領域的應用與前景
山西聚丙乙烯纖維專業生產 質量保證
沙子烘干機的熱源
空調保溫管怎樣做保冷效果好
淺析漩渦氣泵溫度過高的原因