1.在重蒸酚中為什么加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇?
保存在冰箱中的酚,容易被空氣氧化而變成粉紅色,這樣的酚容易降解dna,一般不可以使用。為了防止酚的氧化,可加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇。8-羥基喹啉是帶有淡黃色的固體粉沫,不僅能抗氧化,并在一定程度上能抑制dnase的活性。
2.如何將不同構型的質粒dna區別開?
由于不同構型的dna在瓊脂糖凝膠電泳中的遷移率不同,ccc dna的泳動速度,通過凝膠電泳方法可將不同構型的dna區別開。
3.用酚-氯仿抽提細胞基因組dna時,通常要在酚-氯仿中加少許異戊醇,為什么?
異戊醇可以降低表面張力,從而減少氣泡產生。另外,異戊醇有助于分相,使離心后的上層含dna的水相、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維持穩定。
4.用乙醇沉淀dna時,為什么加入單價的陽離子?
用乙醇沉淀dna時,通常要在溶液中加入單價的陽離子,如nacl 或 naac,na+中和dna分子上的負電荷,減少dna分子之間的同性電荷相斥力,而易于聚集沉淀。
5.在提取rna時經常使用異硫氰酸胍,有什么作用?
rna是一種極易降解的核酸分子。高濃度強變性劑異硫氰酸胍使細胞結構迅速被破壞,使rna從細胞中釋放出來。同時高濃度異硫氰酸胍還使細胞內的rna酶失活,使釋放出的rna不被降解。
6.蛋白印跡中封閉液的作用?
封閉液的作用是封閉未吸附蛋白的部位,以減少非特異性結合背景的影響。常用的封閉液有脫脂奶粉、小牛血清等。
7.dna通常保存在什么緩沖液中?
采用te緩沖液,tris-hcl的緩沖系統,加入edta可以螯合二價金屬離子進而抑制依賴于二價金屬離子的dna酶的活性,對dna起到保護作用。
8.在酶切反應緩沖液中為什么加入bsa?
通過提高溶液中蛋白質的濃度,對酶起保護作用。
9.簡單的克隆載體必需包括什么?
復制起點;選擇標記:主要是抗性基因;多克隆位點:便于外源dna的插入。
10.用酚抽提細胞dna時,有什么作用?
使蛋白質變性。
11.在分離dna時,要使用edta,為什么?
edta是金屬離子螯合劑,螯合二價離子,抑制核酸酶的活性。
12.在分離dna過程中,造成dna分子斷裂的因素有哪些?
核酸酶降解;化學降解;物理剪切。
13.使用離心機應注意什么?
首先應該根據自己的實驗需求選擇合適的離心機和轉子以及離心管,使用離心機時的工作轉速不應該超過離心機、轉子以及離心管的允許轉速。離心前注意嚴格平衡樣品。安裝轉子和轉子蓋要規范、準確。離心時要留人看守,發現離心機異常應立即關閉離心機。離心結束后要安放好轉子。
14.分子生物學實驗室常用的滅菌方法有哪些?
高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、化學藥劑消毒、過濾除菌
15.使用移液器有哪些注意事項?
垂直吸液、慢吸慢放;選擇合適的量程范圍,不能超過量程使用;選擇與移液器匹配的槍頭,頭時不要用力太猛;移液器每日用完后,應旋到刻度。
關鍵詞:離心機 移液器
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