raw264.7細胞轉染效率低怎樣提高轉染效率一直是困擾實驗者的一道難題，特別對于比較大的質粒dna的轉染更是困難；我們實驗室用美國zeta life公司advanced dna rna轉染試劑貨號ad600150轉染raw 264.7細胞整理了一套優化方案希望對大家轉染raw 264.7細胞提高轉染效率有一定的幫助。
下圖是用美國zeta life公司advanced dna rna轉染試劑貨號ad600150在6孔板轉染8000bp左右的pegfp-c1r到raw264.7細胞的熒光和細胞明場圖片。
提高轉染raw 264.7細胞條件如下
一、質粒dna準備
1、質粒dna濃度700ng/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內毒素），我用qiagen試劑盒除去的內毒素
二、操作流程
1、先將細胞接種到細胞培養板，細胞匯合度在70%左右，再進行轉染。
2、復合物制備：將質粒dna與zeta life公司advanced dna rna貨號ad600150轉染試劑按照1:1（12ug:12ul）關系直接混合，用移液器吹吸10-15次混勻，室溫靜止10-15分鐘。
3、將復合物加入*培養基的細胞培養板，并輕輕混勻，放入培養箱中繼續培養（不建議把復合物加入到無血清的培養基里面，我后期會進一步摸索此條件）。
4、轉染24小時后對細胞進行正常換液。
5、質粒dna轉染48小時后熒光檢測轉染效率
三、注意事項：
1本轉染方法不適用在下面轉染試劑的轉染如：lipo3000、,fugene 6、fugene hd、effectene等；
2細胞培養zeta life z7181-500胎牛血清，gibco的dmem;
四、美國zeta life公司advanced dna rna轉染試劑信息：
產品名稱
貨號
規格
數量
報價
advanced dna rna 轉染試劑
ad600025
0.25ml
1
1590
advanced dna rna 轉染試劑
ad600050
0.5
1
2390
advanced dna rna 轉染試劑
ad600075
0.75
1
2890
advanced dna rna 轉染試劑
ad600150
1.5ml
1
4490
advanced dna rna 轉染試劑
ad600500
5ml
1
電詢
advanced dna rna 轉染試劑
ad601000
10ml
1
電詢

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