att-20小鼠垂體瘤細胞培養步驟：
1）復蘇細胞：將含有1ml細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5ml培養基混合均勻。在1000rpm條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6ml*培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的pbs潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%trypsin-0.53mm edta）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的*培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出，在1000rpm條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2ml培養液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。
2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000rpm條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。
方法三：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。
1）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。棄培養基后加入少量胰mei，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000rpm條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數量加入到凍存液中。
關鍵詞：培養箱 顯微鏡

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