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簡單了解鼠抗T2-毒素單克隆抗體的常見問題

鼠抗t2-毒素單克隆抗體是由多種鐮刀菌產生的一種霉菌毒素。主要污染小麥、大麥、玉米等糧食作物及其制品,對人類健康及畜牧業構成了較大危害。t2-毒素主要影響血液,肝臟,腎臟,胰腺肌肉及淋巴細胞的功能,t2-毒素中毒后的一般臨床癥狀為厭食、嘔吐、腹瀉、生長停滯、繁殖和神經機能障礙等。該抗體可運用于elisa、膠體金、免疫親和柱層析等免疫檢測。鼠抗t2-毒素單克隆抗體的常見問題:
1.包被抗體或抗原不適,易產生陽性值較小,或產生變異,即跳管現象。
2.用抗血清不純化,或純化程度太低的抗體包被,則陽性值較小,或沒有陽性梯度。
3.封閉不好或標記物過濃可產生對照值較高。
制備并鑒定抗t-2毒素單克隆抗體雜交瘤細胞株,以期為t-2毒素的快速檢測提供有力的抗體工具。方法:采用琥珀酸酐法將t-2毒素活化為t-2hs,t-2hs在dcc與nhs作用下與牛血清白蛋白(bsa)或卵清白蛋白(ova)偶聯合成*抗原。以t-2hs-bsa為抗原,免疫balb/c小鼠,用elisa篩選、建立分泌抗t-2毒素抗體的雜交瘤細胞株。測定單抗免疫球蛋白亞類及單抗效價,用間接競爭法檢測單克隆抗體細胞株的特異性。結果:建立了1株穩定分泌抗t-2毒素抗體的雜交瘤細胞株t-1b3,該細胞株所分泌的單隆抗體ig亞類為igg1,elisa檢測結果表明抗t-2毒素抗體可以與t-2毒素發生特異性反應,工作濃度為1:6.5×104,ic50為3.6ng/ml。該抗體與ht-2毒素的交叉反應為65.9%,與黃曲霉毒素無交叉。結論:制備出能分泌具有較高特異性和親和力的抗t-2毒素單克隆抗體的雜交瘤細胞株。

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