核酸標記新貴---轉(zhuǎn)染*
哈嘍，艾瑞巴蒂！今天小編本著好物需要分享，來給大家介紹一款我們轉(zhuǎn)染*——一步法核酸標記lable it。不需要構(gòu)建熒光表達載體就可監(jiān)測轉(zhuǎn)染效率，也可進行體內(nèi)體外示蹤，是不是很方便。
label it®核酸標記試劑盒為不同核酸類型提供高效、一步到位的直接標記。采用非酶標記方法和非破壞性的方式將標記共價附著到核酸上，不會改變核酸的結(jié)構(gòu)或影響下游雜交性能，下游可以直接進行體外體內(nèi)示蹤、生物素檢測、活細胞定位等。
一、標記原理及步驟
label it®標記試劑包含一種反應(yīng)性烷基化試劑，該試劑具有通過靜電相互作用促進的強核酸結(jié)合能力。將rna或dna與lable it 在37℃混合孵育1h后純化即可獲得標記完成的核酸，即可進行下游實驗。
圖.labie it 原理及實驗步驟
label it®化學標記試劑組成：
綠色區(qū)域：標記（熒光團或半抗原）
黃色區(qū)域：促進與核酸靜電相互作用的接頭
藍色區(qū)域：反應(yīng)性的烷基化基團
二、產(chǎn)品特點
無損標記任何dna或rna模板，應(yīng)用廣泛
圖1、核酸的無損直接標記。小鼠總rna用label it®cy®3（b）電泳標記，并在agilent rna 6000 nano芯片上與未標記的總rna（a）一起分析。標記和未標記樣品的rna完整性數(shù)（rin）約為9.0。
操作簡單快速，僅需一個反應(yīng)步驟
可調(diào)標記密度–通過最佳標記的dna和rna實現(xiàn)高靈敏度
圖2、靈活的標記反應(yīng)條件。通過調(diào)整反應(yīng)中l(wèi)abel it®試劑（mirus bio）的量或在37°c下調(diào)整標記反應(yīng)的培養(yǎng)時間，可以輕松控制標記密度。
化學標記減少了酶標整合和復(fù)制偏好
成本低，與核酸酶法標記相比，每個反應(yīng)可節(jié)省50%的費用
三、如何選擇標記試劑盒
lable it 系列產(chǎn)品除了通用lable it核酸標記試劑盒外，還有優(yōu)化的標記試劑盒：label it® tracker™，用于不同類型核酸標記。以及l(fā)able?it®核酸修飾試劑盒，主要利用胺官能團修飾dna或rna。
圖3、標記試劑盒種類
四、lable it 系列應(yīng)用案例
圖4、標記質(zhì)粒dna的遞送及yfp報告基因表達。使用label it®核酸標記試劑盒cx羅丹明（mirus bio）標記的transit®-lt1（mirus生物）和eyfp nuc質(zhì)粒dna轉(zhuǎn)染cos-7細胞的共聚焦熒光顯微鏡。圖像顯示轉(zhuǎn)染羅丹明標記的質(zhì)粒dna（紅色）和eyfp表達（黃色）8小時后的cos-7細胞。
圖5。質(zhì)粒定位和表達的間接示蹤。使用transit®-lt1（mirus bio）將label it®tracker -cy®5（mirus生物）標記的peyfp nuc質(zhì)粒（藍色）轉(zhuǎn)染進在wan全培養(yǎng)的cos-7細胞™中。在轉(zhuǎn)染后3、8和20小時采集圖像。藍色信號表示cy®5標記質(zhì)粒的細胞定位，綠色信號表示細胞自發(fā)熒光，黃色信號表示核黃色熒光蛋白（yfp）報告子的表達。使用共焦顯微鏡獲取圖像。
圖6、c6細胞中的sirna追蹤。將c6膠質(zhì)瘤細胞接種在6孔板中的聚-d-賴氨酸涂層蓋玻片上并孵育過夜。將8µl transit -tko®轉(zhuǎn)染試劑稀釋在200µl無血清培養(yǎng)基和50 nm（孔中的最終濃度）label it®sirna tracker cytm3標記的sirna雙鏈體添加到稀釋的transit -tko®轉(zhuǎn)染試劑中以形成復(fù)合物。隨后，將這些復(fù)合物添加到wan全生長培養(yǎng)基中生長的45%融合的c6細胞中。轉(zhuǎn)染后20小時在zeiss lsm 510共焦顯微鏡上獲得共焦圖像。
訂閱信息：
貨號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格
mir 3225 label it® nucleic acid labeling kit, fluorescein 標記 25 µg 核酸
mir 3425 label it® nucleic acid labeling kit, biotin 標記 25 µg 核酸
mir 3725 label it® nucleic acid labeling kit, cy®5 標記 25 µg 核酸
mir 4125 label it® nucleic acid labeling kit, tm-rhodamine 標記 25 µg 核酸
mir 3900 label it® nucleic acid modifying kit, amine 修飾 100 µg of 核酸
mir 7904 label it® plasmid delivery control, cy®3 10 µg
mir 7900 label it® rnai delivery control, cy®3 10 µg (0.75 nmol)
mir 7212 label it® sirna tracker™ intracellular localization kit, cy®3 標記 50 µg sirna
mir 7214 label it® sirna tracker™ intracellular localization kit, cx-rhodamine 標記 50 µg sirna
mir 7216 label it® sirna tracker™ intracellular localization kit, fluorescein 標記 50 µg sirna
mir 7020 label it® tracker™ intracellular nucleic acid localization kit, cy®3 標記 50-200 µg 質(zhì)粒dna
mir 7022 label it® tracker™ intracellular nucleic acid localization kit, cx-rhodamine 標記 50-200 µg 質(zhì)粒dna
mir 7024 label it® tracker™ intracellular nucleic acid localization kit, biotin 標記 50-200 µg 質(zhì)粒dna
mir 7025 label it® tracker™ intracellular nucleic acid localization kit, fluorescein 標記 50-200 µg 質(zhì)粒dna
上海優(yōu)寧維生物科技股份有限公司
試劑 | 耗材 | 儀器 | 軟件 | 定制 | 實驗服務(wù) | 供應(yīng)鏈
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圖3、標記試劑盒種類
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