服務介紹:
edu(5-ethynyl-2’- deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶(t)滲入正在復制的dna分子中,通過基于edu與apollo®熒光染料的特異性反應快速檢測細胞dna復制活性,適用于細胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、dna修復、病毒復制、細胞標記示蹤等方面。
實驗結果展示:
實驗流程: 1.每孔加入2 mg/mlglycine,脫色搖床孵育5分鐘后,棄glycine溶液;
注:作用是中和多聚甲醛,當采用其他方式進行細胞固定時可省略此步驟;
2.每孔加入100 μl pbs,脫色搖床清洗5分鐘,棄pbs;
3.每孔加入100μl滲透劑(0.5% tritonx-100的pbs)脫色搖床孵育10分鐘;pbs清洗1次,5分鐘。
注:當實驗需要進行其他抗體染色,或由于某些細胞類型對染料的吸附性較高,可能需要增強細胞膜通透性。
4.每孔加入100 μl的1x apollo®染色反應液,避光、室溫、脫色搖床孵育30分鐘后,棄染色反應液;
5.加入100 μl滲透劑(0.5% tritonx-100的pbs)脫色搖床清洗2~3次,每次10分鐘,棄滲透劑;
6.(加強)每孔每次加入100 μl甲醇清洗1~2次,每次5分鐘;pbs清洗1次,每次5分鐘。
注:由于某些細胞對染料的吸附性較高,需采用加強方式洗脫以降低染料背景。
染dapi,封片,鏡檢。
樣本運輸要求: 1.組織樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上,常溫運輸送樣。2.石蠟切片常溫保存運輸
3.冰凍切片-20℃保存運輸
4.細胞爬片固定液浸泡,4℃保存運輸
關鍵詞:脫色搖床
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