NCI-H508 人結腸直腸腺癌細胞傳代、復蘇技巧
nci-h508 人結腸直腸腺癌細胞
human colorectal adenocarcinoma cells ,h508
貨號：yj-h161（str鑒定）
價格： 1800.0
規格： 1*106
細胞介紹
nci-h508 [h508] 是一種來源于轉移至腹壁的細胞系，該細胞系從患者用 5-氟尿嘧啶治療后獲得。nci-h508 [h508] 來自一名患有結直腸腺癌的 55 歲白人男性患者的盲腸, 混合帶有一些附著細胞的圓形細胞漂浮聚集體,該細胞系由 af gazdar 保藏。
細胞特性
1）來源：大腸;盲腸結直腸腺癌
2）形態：上皮細胞樣貼壁生長 少量圓形細胞漂浮聚集體
3）含量：>1x10^6細胞數
4）規格：t25瓶或者1ml凍存管包裝
5）用途：僅供科研使用。
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1ml凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。
（2）t25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將t25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
2）請在4或5x顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3）半貼細胞和貼壁不牢（懸浮）細胞：t25瓶置于37℃培養箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶需收集t25瓶中的懸浮細胞離心后用完全培養基重懸后打回到原培養瓶中繼續培養，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養基中懸浮的細胞離心后回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后第一次傳代建議t25培養瓶1：2傳代 。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備rpmi-1640（推薦yj-0002）培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。
備注：該細胞為貼壁生長，混合帶有一些附著細胞的圓形細胞漂浮聚集體。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%dmso，現用現配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：
將含有1ml細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6ml完全培養基的離心管中混合均勻。在1000rpm條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養。
該細胞為輕微貼壁和少量懸浮圓形圓形細胞漂浮聚集體培養的細胞，傳代可以參考以下方法：
1. 收集：將培養瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的pbs潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢pbs潤洗后細胞會脫落所以pbs也要回收到離心管中。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mm edta于培養瓶中（t25瓶1-2ml，t75瓶2-3ml）置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%fbs的培養基來終止消化。
3. 將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2ml培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新t25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。
下面t25瓶為例；
1.細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細胞/ml.
2.1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
3.將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
注意事項
1.收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。
2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據。
3.由于細胞狀態受環境、操作和運輸等多方面因素影響，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內的細胞狀態，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
5.客戶在細胞培養過程中，有任何技術問題可以聯系技術售后，我們隨時給予解答。
從2011年開始我們致力于在生命科學領域、生物醫學實驗外包及論文潤色服務，協助客戶各類實驗服務及論文潤色十多年，是您值得信賴的科研合作伙伴!
如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯系。
實驗代做服務：
免疫組化ihc染色實驗服務
細胞、組織tunel凋亡染色實驗服務
試劑盒免費代檢測
實驗室代做實驗項目
透射電鏡服務實驗服務
石蠟/冰凍切片tunel凋亡
核仁組成區嗜銀-agnor染色實驗服務
免疫共沉淀（chirp）實驗
rna結合蛋白免疫沉淀（rip）實驗代做
酶聯免疫（elisa）技術服務
雞傳染性法氏囊病病毒vp2抗體診斷試劑盒
喹諾酮類快速檢測試劑盒
組織芯片/微陣列定制技術服務
染色質免疫沉淀分析(clip)實驗服務
多因子液相芯片技術（luminex）實驗
免疫細胞化學icc實驗服務
atp/adp檢測實驗服務
蛋白雙向(2-d)電泳實驗服務
蛋白相互作用分析
堿性磷酸酶染色實驗服務
pkc活性檢測實驗
非標定量實驗
（label-free）
dige技術實驗服務
端粒酶活性檢測實驗
細胞生長曲線的測定
掃描電鏡服務
nf-kb p65活性檢測實驗
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nci-h508 [h508] 是一種來源于轉移至腹壁的細胞系，該細胞系從患者用 5-氟尿嘧啶治療后獲得。nci-h508 [h508] 來自一名患有結直腸腺癌的 55 歲白人男性患者的盲腸, 混合帶有一些附著細胞的圓形細胞漂浮聚集體,該細胞系由 af gazdar 保藏。
細胞特性
1）來源：大腸;盲腸結直腸腺癌
2）形態：上皮細胞樣貼壁生長 少量圓形細胞漂浮聚集體
3）含量：>1x10^6細胞數
4）規格：t25瓶或者1ml凍存管包裝
5）用途：僅供科研使用。
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1ml凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。
（2）t25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將t25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
2）請在4或5x顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3）半貼細胞和貼壁不牢（懸浮）細胞：t25瓶置于37℃培養箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶需收集t25瓶中的懸浮細胞離心后用完全培養基重懸后打回到原培養瓶中繼續培養，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養基中懸浮的細胞離心后回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后第一次傳代建議t25培養瓶1：2傳代 。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備rpmi-1640（推薦yj-0002）培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。
備注：該細胞為貼壁生長，混合帶有一些附著細胞的圓形細胞漂浮聚集體。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%dmso，現用現配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：
將含有1ml細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6ml完全培養基的離心管中混合均勻。在1000rpm條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養。
該細胞為輕微貼壁和少量懸浮圓形圓形細胞漂浮聚集體培養的細胞，傳代可以參考以下方法：
1. 收集：將培養瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的pbs潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢pbs潤洗后細胞會脫落所以pbs也要回收到離心管中。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mm edta于培養瓶中（t25瓶1-2ml，t75瓶2-3ml）置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%fbs的培養基來終止消化。
3. 將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2ml培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新t25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。
下面t25瓶為例；
1.細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細胞/ml.
2.1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
3.將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
注意事項
1.收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。
2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據。
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