聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction)簡(jiǎn)稱pcr，是一種體外高效擴(kuò)增特定dna片段的分子生物學(xué)技術(shù)。該技術(shù)的發(fā)明人是kary mullis，他從1983年開(kāi)始研究pcr技術(shù)，1985年開(kāi)始被逐漸采用，成為分子生物學(xué)的一項(xiàng)常規(guī)手段，并得到了廣泛的應(yīng)用，在臨床診斷、生物醫(yī)學(xué)研究和法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域都具有重要意義。pcr是在體外模擬體內(nèi)dna復(fù)制的過(guò)程，它用加熱的辦法讓需要擴(kuò)增的dna片段變性解鏈成兩條單鏈，人工合成的一對(duì)引物讓它們結(jié)合到dna模板（分別結(jié)合到兩條鏈上）的兩端，dna聚合酶即可以大量復(fù)制該模板。了解了pcr的基本過(guò)程，再一起來(lái)學(xué)習(xí)一下pcr體系及各類常見(jiàn)pcr辨析吧！
pcr體系
1. 模板
需要研究或擴(kuò)增的目的核酸分子，dna可以直接擴(kuò)增，rna需要增加一步逆轉(zhuǎn)錄，或者在體系中加逆轉(zhuǎn)錄酶一步法進(jìn)行rt-pcr擴(kuò)增；
2. 引物
良好設(shè)計(jì)的引物，是擴(kuò)增特異性及擴(kuò)增效率的關(guān)鍵因素之一；
3. taqase
pcr體系的核心組分，taqase的性能，直接決定了擴(kuò)增體系能否達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求；
針對(duì)不同類型的模板、特異性的要求、產(chǎn)物保真度的要求、擴(kuò)增產(chǎn)物的長(zhǎng)度，需要選用能滿足對(duì)應(yīng)要求的taqase；所選用的酶如果不匹配，實(shí)驗(yàn)是無(wú)法成功的；
對(duì)一株taqase的性能評(píng)價(jià)，主要是如下幾個(gè)方面：擴(kuò)增效率，擴(kuò)增速度，保真度，除了催化鏈延伸之外的其它活性，抗逆性等；
4. dntp
dntp的濃度和質(zhì)量，也是影響擴(kuò)增產(chǎn)率的一個(gè)重要因素；dntp分子中，含有一個(gè)高能磷酸鍵，是影響dntp穩(wěn)定性的關(guān)鍵因素，高能磷酸鍵的斷裂也是造成dntp質(zhì)量不合格的分子層面的原因；
5. buffer
為pcr反應(yīng)體系提供穩(wěn)定的工作環(huán)境，主要環(huán)境因素為ph值，離子強(qiáng)度等；
6. mg++
因?yàn)殒V離子對(duì)taqase活性影響大，所以一般buffer之外，還單獨(dú)帶一管mg++，方便用戶靈活調(diào)節(jié)體系里面mg++濃度；
除了上述六種必要的組分之外，還有較多的工具蛋白或者小分子化合物，能對(duì)pcr體系起到相應(yīng)的作用，這方面累積的研究成果也比較多。
各類常見(jiàn)pcr辨析
1. pcr，通常指的是普通pcr，以雙鏈dna為模板，以dntp為底物，大量（30個(gè)循環(huán)理論上可以使產(chǎn)物增加到模板初始摩爾數(shù)的10的9次方倍）擴(kuò)增雙鏈dna。產(chǎn)物通常以電泳及凝膠成像方式來(lái)分析。
2. qpcr和real-time pcr，指的是實(shí)時(shí)熒光定量pcr，以dna或cdna為模板，以dntp為底物，以熒光基團(tuán)為報(bào)告分子，收集熒光信號(hào)從而對(duì)擴(kuò)增出的dna進(jìn)行定量分析。為避免和rt-pcr（逆轉(zhuǎn)錄pcr）混淆，現(xiàn)在一般不太常用real-time pcr，通常交流，用qpcr指代更明確。
3. rt-pcr，指的是逆轉(zhuǎn)錄pcr，以由mrna逆轉(zhuǎn)錄成的cdna為模板，以dntp為底物，進(jìn)行dna的擴(kuò)增及檢測(cè)。
4. rt-qpcr，指的是實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄pcr，是qpcr+rt-pcr的組合，將總rna或mrna逆轉(zhuǎn)錄成cdna后再作為模板，以dntp為底物，進(jìn)行產(chǎn)物的定量分析。

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