小鼠弓形蟲(Tox)ELISA試劑盒使用方法？
本試劑盒僅供研究使用。
96t
使用目的：
本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關液體樣本中弓形蟲(tox)表達。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠弓形蟲(tox)表達。用純化的小鼠弓形蟲(tox)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中弓形蟲(tox)相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與hrp標記的弓形蟲(tox)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過洗滌后加底物tmb顯色。tmb在hrp酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（od值），與cutoff值相比較，從而判定標本中小鼠弓形蟲(tox)的存在與否。
試劑盒組成
1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
7
終止液
6ml×1瓶
2
酶標試劑
6ml×1瓶
8
陽性對照
0.5ml×1瓶
3
酶標包被板
12孔×8條
9
陰性對照
0.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液
6ml×1瓶
10
說明書
1份
5
顯色劑a液
6ml×1瓶
11
封板膜
2張
6
顯色劑b液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含nan3的樣品，因nan3抑制辣根過氧化物酶的（hrp）活性。
操作步驟
編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑a50μl，再加入顯色劑b50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（od值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
計算和結果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20
臨界值（cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品od值<臨界值（cut off）者為弓形蟲(tox)陰性
陽性判定：樣品od值≥臨界值（cut off）者為弓形蟲(tox)陽性。
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2m的硫酸，使用時必須注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
關鍵詞：酶標儀
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實驗原理
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1
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20ml×1瓶
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終止液
6ml×1瓶
2
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6ml×1瓶
8
陽性對照
0.5ml×1瓶
3
酶標包被板
12孔×8條
9
陰性對照
0.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液
6ml×1瓶
10
說明書
1份
5
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6ml×1瓶
11
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6
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12
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標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含nan3的樣品，因nan3抑制辣根過氧化物酶的（hrp）活性。
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加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
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加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
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顯色：每孔先加入顯色劑a50μl，再加入顯色劑b50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
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