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分子生物學常用試劑的配制

分子生物學常用試劑的配制
瓊脂糖凝膠的配制
根據所需凝膠的濃度秤取瓊脂糖,加入相應電泳緩沖液中,用微波爐加熱煮沸至瓊脂糖*溶解,加入適量eb混勻,適當冷卻后傾入凝膠鑄槽中,插入梳子,凝膠厚度不超過梳孔,如有氣泡產生則用玻璃棒驅除,不能過早拔除梳子,應待凝膠*凝結后才能拔除梳子。
3.p1、p2、p3的配制p1的配制:在800ml去離子水中溶入tris堿6.06g,na2edta?2h2o3.72g,用hcl調整ph至8.0,用去離子水調整容積至1升,每升p1內加入rnasea100mg。
p2的配制:在950ml去離子水中溶入naoh8.0g,20%sds50ml,調整容積至1升。
p3的配制:在500ml去離子水中溶入*294.5g,用冰醋酸調整ph值至5.5,用去離子水調整容積至1升。
4.常用緩沖液:
te
ph7.4
10mmol/ltris?cl(ph7.4)
1mmol/ledta(ph8.0)
ph7.6
10mmol/ltris?cl(ph7.6)
1mmol/ledta(ph8.0)
ph8.0
10mmol/ltris?cl(ph8.0)
1mmol/ledta(ph8.0)
ste(亦稱ten)
0.1mmol/lnacl
10mmol/ltris?cl(ph8.0)
1mmol/ledta(ph8.0)
stet
0.1mmol/lnacl
10mmol/ltris?cl(ph8.0)
1mmol/ledta(ph8.0)
5%tritonx-100
tnt
10mmol/ltris?cl(ph8.0)
150mmol/lnacl
0.05%tween20
電泳緩沖液
tris-乙酸(tae):50×濃貯存液(每升):242gtris堿
57.1ml冰乙酸
100ml0.5mmol/ledta(ph8.0)
使用時再稀釋50倍。
tris-磷酸(tpe):10×濃貯存液(每升):108gtris堿
15.5ml85%磷酸(1.679g/ml)
40ml0.5mmol/ledta(ph8.0)
使用時再稀釋10倍。
tris-硼酸(tbe):5×濃貯存液(每升):54gtris堿
27.5g硼酸20ml0.5mmol/ledta(ph8.0)
使用時再稀釋10倍。
堿性緩沖液:1×使用液(每升):5ml10mol/lnaoh
2ml0.5mmol/ledta(ph8.0)
tris-*:5×濃貯存液(每升):15.1gtris堿
94g*(電泳級)(ph8.3)
50ml10%sds(電泳級)
2×sds凝膠加樣緩沖液
100mmol/ltris?hcl(ph6.8)
200mmol/l二硫蘇糖醇(dtt)
4%sds(電泳級)
0.2%溴酚藍
20%甘油
30%丙烯酰胺:
將29g丙烯酰胺和1gn,n’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中,加熱至37℃溶解之,補加
水至終體積為100ml。用nalgene濾器(0.45孔徑)過濾除菌查證該溶液的ph值應不大于7.0,置棕色瓶中
保存于室溫。
10mol/l乙酸銨:
把770g乙酸銨溶解于800ml水中,加水定容至1l后過濾除菌。
1mol/lcacl2:
在200ml純水中(milli-q水或相當級別的水)溶解54gcacl2?6h2o,用0.22濾器過濾除菌,分裝成10ml小份貯存于-20℃。
2.5mol/lcacl2:
在20ml蒸餾水中溶解13.5gcacl2?6h2o,用0.22濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20℃。
1mol/l二硫蘇糖醇(dtt):
用20ml0.01mol/l乙酸鈉溶液(ph5.2)溶解3.09gdtt,過濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。
0.5mol/ledta(ph8.0):
在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉(edta-na?h2o),在磁力攪拌器上劇烈攪拌,用naoh調節溶液的ph值至8.0,然后定容至1升,分裝后高壓滅菌備用。
溴化乙錠(10mg/ml):
在100ml水中加入1g溴化乙錠,磁力攪拌數小時以確保其*溶解,然后用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中,保存于室溫。
1mol/lmgcl2:
在800ml水中溶解203.3gmgcl2?6h2o,用水定容至1升,分裝成小份并高壓滅菌備用。
酚::
把酚和等體積混合后用0.1mol/ltris?cl(ph7.6)抽提幾次以平衡這一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆蓋等體積的0.01mol/ltris?cl(ph7.6)液層,保存于4℃。
磷酸緩沖鹽溶液(pbs):
在800ml蒸餾水中溶解8gnacl、0.2gkcl、1.44gna2hpo4和0.24gkh2po4,用hcl調節溶液的ph值至7.4,加水定容至1升,高壓蒸汽滅菌20min。保存于室溫。
乙酸鉀溶液(用于堿裂解):
在60ml5mol/l乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水,即成鉀濃度為3mol/l而乙酸根濃度5mol/l的溶液。
3mol/l乙酸鈉(ph5.2和7.0):
在800ml水中溶解408.1g三水乙酸鈉,用冰乙酸調節ph值至5.2或用稀乙酸調節ph至7.0,加水定容至1升,分裝后高壓滅菌。
1mol/ltris:
在800ml水中溶解121.1gtris堿,加入濃hcl調節ph至所需值。
phhcl
7.470ml
7.660ml
8.042ml
應使溶液冷至室溫后方可后調定ph值,加水定容至1升,分裝后高壓滅菌。
tris緩沖鹽溶液(tbs):
在800ml蒸餾水中溶解8gnacl、0.2gkcl和3gtris堿,加入0.015酚紅并用hcl調ph值至7.4,用蒸餾水定容至1升,分裝后在15lbf/in2(1.34×105pa)高壓下蒸汽滅菌20分鈡,于室溫保存。
5mmol/lnh4ac溶液:
秤取乙酸銨192.7g,加重蒸水250ml混勻,加重蒸水定容至500ml,1.1kg/cm2滅菌20min。
10mg/mlbsa(小牛血清白蛋白)溶液:
秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml滅菌重蒸水中。置4℃冰箱貯存備用。
10%十二烷基硫酸鈉(sds):
在900ml水中溶解100g電泳級sds,加熱至68℃助溶,加入幾滴濃鹽酸調節溶液的ph值至7.2,加入水定容至1l,分裝備用。

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