試劑盒應(yīng)用
本試劑盒主要用于細(xì)菌16s rdna 的快速檢測(cè)，無(wú)需經(jīng)過(guò)繁瑣的基因組dna 提取純化，取樣后直接pcr 擴(kuò)增即可獲得16s rdna 信息，通過(guò)比對(duì)16s 片段序列，終獲得細(xì)菌種屬信息。本試劑盒可以檢測(cè)低至104 個(gè)/ml 個(gè)細(xì)菌，對(duì)難培養(yǎng)、珍貴樣本、表型不能鑒定的未知細(xì)菌快速擴(kuò)增尤為方便。使用本試劑盒無(wú)需提取純化，可直接對(duì)菌斑、甘油菌或?qū)?shù)菌進(jìn)行檢測(cè)，從而
大大縮短了檢測(cè)時(shí)間。試劑盒中提供的16s pcr premix 已包含有染料，pcr 結(jié)束后直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，pcr 產(chǎn)物可直接進(jìn)行測(cè)序分析。本產(chǎn)品僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等域。保存條件
-20oc 保存。使用時(shí)請(qǐng)置于冰上。
使用方法
1、樣本準(zhǔn)備：
1）菌液：取對(duì)數(shù)菌液1-3 μl 加入pcr 反應(yīng)體系中。
2）甘油菌：取1μl 菌液加入pcr 反應(yīng)體系中。
3）單菌落：無(wú)菌吸頭或者無(wú)菌牙簽挑取單個(gè)菌落置于500 μl 無(wú)菌生理鹽水中，渦旋混合均勻，取
1-3 μl 加入pcr 反應(yīng)體系中。
2、推薦pcr 反應(yīng)體系
4、瓊脂糖凝膠電泳
使用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，不同菌株電泳片段稍微差別，一般為1.5kb 左右。
5、pcr 產(chǎn)物回收和測(cè)序
使用切膠回收試劑盒進(jìn)行回收，并使用以下推薦引物進(jìn)行測(cè)序。將dna 測(cè)序結(jié)果與ncbi 數(shù)據(jù)
庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，確定細(xì)菌種類。注意事項(xiàng)
1、超凈臺(tái)中操作，應(yīng)佩戴無(wú)菌手套，穿實(shí)驗(yàn)服，操作用75%乙醇對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行消毒。
2、使用無(wú)菌吸頭和離心管，開蓋務(wù)必輕柔，減少氣溶膠污染。
3、盡可能使用2 次純化細(xì)菌，以提高測(cè)序成功率。
4、盡可能使用對(duì)數(shù)的細(xì)菌。
5、為防止試劑盒污染，請(qǐng)勿將不同批號(hào)試劑盒混用。

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