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人腦鈉肽(BNP)試劑盒說明書

人腦鈉肽(bnp)elisa試劑盒
(用于血清、血漿、組織勻漿、細胞培養上清液和其它生物體液內)
一、原理:
本實驗采用雙抗體夾心 abc-elisa法。用抗人 bnp 單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的 bnp與單抗結合,加入*化的抗人bnp,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的streptavidin與*結合,加入底物工作液顯藍色,后加終止液硫酸,在450nm處測od值,bnp濃度與od值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中bnp濃度。
二、試劑盒組成(2-8℃保存):
酶標板(coated wells)
96孔
酶標抗體工作液(enzyme conjugate)
12ml
10×標本稀釋液(sample buffer)
12ml
20×濃縮洗滌液(wash buffer)
50ml
標準品(standards):2ng/ml
1瓶
底物工作液(tmb solution)
12ml
抗體工作液(biotinylated antibody)
6ml
終止液(stop solution)
12ml
三、準備試劑與收集血樣:
10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。收集標本:血清、血漿(edta、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20 ℃或-70 ℃)保存,避免反復凍融。標準品液配制:取8個1.5ml離心管,管加標本稀釋液900ul,第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在管中加入2ng/ml的標準品溶液100ul置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)四、檢測程序:
加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應板置振蕩器(400-500rpm)室溫(18-25℃)120分鐘。洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。每孔加入蒸餾水和抗體工作液各50ul(空白除外)。將反應板充分混勻后置37℃20分鐘。洗板:同前。每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃10分鐘。洗板:同前。每孔加入底物工作液100ul,置37 ℃暗處反應15分鐘。每孔加入100ul終止液混勻。30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。五、結果計算與判斷:
所有od值建議減除空白值后再行計算。如空白od低于0.1,也可以直接計算。以標準品200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、0 pg/ml為橫坐標,od值為縱坐標,使用軟件作圖,畫出標準曲線。根據樣品od值計算出相應bnp含量即可。軟件可以向本公司郵件索取。六、試劑盒性能:
1靈敏度:小的bnp 檢測濃度小于1pg/ml。
2.特異性:可同時檢測重組或天然的人 bnp。不與其它細胞因子有交叉反應。
3.重復性:板內、板間變異系數均小于10%。
七、注意事項:
1.以上標準孔及待測的樣品均建議做復孔,每次測定同時做標準曲線。
2. 洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致度誤差及od值錯誤地升高。
3.檢測時所有試劑都要恢復到室溫。板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。
4.試劑盒使用超敏tmb溶液,若顯色過深會出現絮狀物,屬正常現象,不影響結果判讀。
5.說明書中試劑盒組成為96t的量,48t的量應減半!
6. 本試劑盒宜置4oc冰箱保存。僅用于科研,不能用于臨床診斷!

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