海藻糖廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中。由于海藻糖具有的不同于其他碳水化合物的生物學特性,能在干旱、高溫、脫水、冷凍、高滲透壓及毒性物質等惡劣環境下保護生物體細胞蛋白質、脂肪、糖類、核酸等組分不受損害。正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定。測定原理:蒽酮比色法。具有靈敏度高﹑簡便快捷﹑適用于微量樣品的測定等優點。
需自備的儀器和用品:可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1ml玻璃比色皿﹑研缽、濃硫酸(不允許快遞) 和蒸餾水。
海藻糖提取:
1、細菌或細胞處理:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200w,超聲3s,間隔10s,重復30次),室溫靜置45min,振蕩3~5次,冷卻后,8000g,25℃離心 10min,取上清。
2、組織的處理:按照組織質量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約 0.1g組織,加入1ml提取液),冰浴勻漿,室溫靜置45min,振蕩3~5次,冷卻后,8000g,25℃離心10min,取上清。
3、血清(漿)的處理:按照血清(漿)體積(ml):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取0.1ml血清(漿)加入1ml 提取液),冰浴勻漿,室溫靜置45min,振蕩3~5次,冷卻后,8000g,25℃離心10min,取上清。
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