人激活素a (activin a)elisa試劑盒
(用于血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))
一、原理:
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 abc-elisa法。用抗人 activin a 單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 activin a與單抗結(jié)合,加入*化的抗人activin a,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的streptavidin與*結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,后加終止液硫酸,在450nm處測(cè)od值,activin a濃度與od值成正比,可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中activin a濃度。
二、試劑盒組成(2-8℃)
酶標(biāo)板(coated wells)
96孔
酶標(biāo)抗體工作液(enzyme conjugate)
12ml
10×標(biāo)本稀釋液(sample buffer)
12ml
20×濃縮洗滌液(wash buffer)
50ml
標(biāo)準(zhǔn)品(standards):80ng/ml
1瓶
底物工作液(tmb solution)
12ml
抗體工作液(biotinylated antibody)
6ml
終止液(stop solution)
12ml
三、準(zhǔn)備試劑與收集血樣:
10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。收集標(biāo)本:血清、血漿(edta、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè),2-8℃保存48小時(shí);更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍(-20 ℃或-70 ℃)保存,避免反復(fù)凍融。標(biāo)準(zhǔn)品液配制:取8個(gè)1.5ml離心管,管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在管中加入80ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)?四、檢測(cè)程序:
加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃40分鐘。洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。每孔加入蒸餾水和抗體工作液各50ul(空白除外)。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃20分鐘。洗板:同前。每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃10分鐘。洗板:同前。每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。每孔加入100ul終止液混勻。30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。?五、結(jié)果計(jì)算與判斷:
所有od值建議減除空白值后再行計(jì)算。如空白o(hù)d低于0.1,也可以直接計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)品8000、4000、2000、1000、500、250、125、0 pg/ml為橫坐標(biāo),od值為縱坐標(biāo),使用軟件作圖,畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品od值計(jì)算出相應(yīng)activin a含量即可。軟件可以向本公司郵件索取。?六、試劑盒性能:
1.靈敏度:小的activin a檢測(cè)濃度小于62pg/ml。
2.特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人activin a。不與其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。
3.重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
七、注意事項(xiàng):
以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2. 洗滌過(guò)程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及od值錯(cuò)誤地升高。
3. 檢測(cè)時(shí)所有試劑都要恢復(fù)到室溫。板條開(kāi)封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。
4. 試劑盒使用超敏tmb溶液,若顯色過(guò)深會(huì)出現(xiàn)絮狀物,屬正常現(xiàn)象,不影響結(jié)果判讀。
5. 說(shuō)明書(shū)中試劑盒組成為96t的量,48t的量應(yīng)減半。
6. 本試劑盒宜置4oc冰箱保存。僅用于科研,不能用于臨床診斷!
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