本試劑盒針對小反芻獸疫病毒的高度保守區域設計特異性引物和探針，在反應體系中含小反芻獸疫病毒基因組模板的情況下，pcr反應得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量pcr儀對pcr過程中相應通道信號進行實時監測和輸出，實現檢測結果的定性分析。
【主要組成成份】
序號
組成
25t/盒
50t/盒
1
pprvrt-pcr反應液
437.5μl×1管
875μl×1管
2
pprv混合酶液
62.5μl×1管
125μl×1管
3
pprv陽性對照
40 μl×1管
40 μl×1管
4
pprv陰性對照
40 μl×1管
40 μl×1管
5
說明書
1份
1份
注：陰性對照為偶蹄獸類基因組dna，陽性對照為失去活性的小反芻獸疫病毒cdna。
【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復凍融，有效期12個月。
【適用儀器】abi 系列、bio-rad系列、agilent stratagene mx系列 、roche lightcycler r480、cepheid smartcycler、rotor-gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量pcr儀。
【樣本要求】
1. 適用標本類型：發病動物血液、空腸及小腸腸內容物及組織臟器(腸道組織、腸系膜及淋巴結等)和病毒培養液。
2.標本采集，方法如下：
(1) 血清：用一次性注射器取靜脈血2-3ml，轉至5ml 的干燥管中，密閉送檢。
(2) 腸內容物：無菌條件下取腸道內容物約1g 左右，置入1ml 含有1.0ml pbs(或生理鹽水)的5ml 離心管中，立即送檢。
(3) 組織臟器：取發病動物腸道組織及腸系膜淋巴結等組織約1g，置一1.5ml的潔凈離心管中，密閉送檢。
3.應避免標本間交叉污染。
4.標本收集后可立即檢測；若不能立即檢測，可置于2～8℃冷藏過夜保存；如需長期保存，標本應凍存于-80℃以下，避免反復凍融。
【檢驗方法】
1.試劑準備（試劑準備區）
（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑，充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。
（2）核算當次實驗所需要的反應數（n），并根據如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。
n =陰性對照數（1t）+陽性對照數（1t）+誤差預留量（1t）+樣本數
單反液配制表
rt-pcr反應液
17.5μl
混合酶液
2.5μl
（3）在無菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時離心。按照20 μl/管分裝量將試劑分裝至pcr反應管。
2.樣本準備（樣本處理區）
用qiagen、roche公司rna提取試劑盒提取rna，具體操作按照其試劑盒說明書操作。
3.加樣
在上述制備好的pcr反應樣本管中分別加入處理好的待測標本rna各5 μl、終體積25 μl/管，蓋好pcr反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到pcr儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5 μl試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為25 μl/管，蓋好pcr反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到pcr儀器上。
4. pcr（pcr擴增區）
（1）取樣本處理區準備好的pcr反應管，放置在實時熒光定量pcr儀樣品槽相應位置，并記錄放置順序。
（2）按下表設置儀器核酸擴增相關參數進行pcr擴增。
反應體積
25 μl
通道選擇
fam通道采集小反芻獸疫病毒熒光信號
pcr
反應
條件
步驟
條件
循環數
反轉錄
50℃：10分鐘（min）
1
預變性
95℃：3分鐘（min）
1
pcr擴增
95℃：5秒（s）
40
55℃：40秒（s）
（此階段結束時采集熒光信號）
注：abi系列熒光pcr儀在設置時不選rox校正，設置淬滅基團選擇none。
【參考值（參考范圍）】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽性對照：有典型s型擴增曲線或ct值≤35。
（2）陰性對照：ct值＞38或無ct值，線形為直線或輕微斜線，無指數增長期。
2.標本結果判定：
（1）陽性：標本檢測結果ct值≤35或有明顯指數增長期。
（2）可疑：標本檢測結果ct值在35～38范圍內。此時應對標本進行重復檢測，如重復實驗結果ct值仍在35～38范圍內，有明顯指數增長期，則判定為陽性，否則為陰性。
（3）陰性：標本檢測結果ct值＞38或無ct值。
【檢驗結果的解釋】
通道及檢測結果
標本檢測結果解釋
fam
陽性（＋）
標本中檢出小反芻獸疫病毒rna
陰性（－）
標本中未檢出小反芻獸疫病毒rna

---

精密行星減速機正確的安裝、使用和維護
借助中非農業現代化合作計劃，雷沃農機產品推廣穩中有升
江西防火涂層板*廠家
DZ-C 水產養殖水質檢測儀
Coriell DNA標準品NA12878介紹
小反芻獸疫病毒檢測試劑盒-PCR法
潛水式攪拌器組成部件的作用說明
高剪切均質乳化機在飲料行業中的應用
濰坊美的空調工程施工要注意什么？
DANFOSS制冷需要擁抱數字化到達Z世代
電子汽車衡現場試驗的替代法
重慶磨床過濾機增加了磁性分離器，使機床切削液實現了二級過濾
筆記本轉軸扭力機開發原因以及簡介
鋁用炭塊空氣反應性測定儀-GCTKK-700產品介紹
在線計數粒徑檢測儀是開發設計的*
巖棉保溫板的防潮和耐用性能非常好
Q611F氣動不銹鋼三片式內螺紋球閥之產品特性及應用
二維材料PdPS線性二色性轉換特性研究
日產550噸化灰機發展前景非常客觀
全自動袖口式熱收縮PE膜巖棉板包裝機