賽默飛離子色譜法測定全血樣品中的*
引言：*是一種水溶性b族維生素，在水溶液中以四價銨陽離子形式存在，是 正常代謝*的物質(zhì)。準確分析全血樣品中的*，對于代謝等生物領(lǐng)域 具有很重要的作用，是新型反應(yīng)急性冠脈綜合癥的指標，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域意義重 大。同時*（choline）作為一種營養(yǎng)食品添加劑，具有促進大腦的發(fā)育、改 善大腦的代謝、促進神經(jīng)系統(tǒng)的信息傳遞、增強視力、改善鈣的代謝等功能[1]。
國標中檢測*的方法有g(shù)b/t 5413.20-1997《嬰幼兒配方食品和乳粉 *的測定》[2]，該方法采用酶水解，分光光度法進行測定，成本高效率低。 近年來文獻報道食品中*的測定方法為液相色譜法[3]和離子色譜法[4-6]，液相 色譜法一般采用蒸發(fā)光散射檢測器進行檢測，而此檢測器非常用檢測器，該 方法不易推廣。離子色譜電導(dǎo)檢測器檢測靈敏度高，選擇性好，易推廣，在 食品檢測方面應(yīng)用較多，但是應(yīng)用于全血樣品中*的檢測鮮有報道。血樣 不同于常規(guī)的食品樣品，不易分散。實驗室采用曲那通-x100對血樣進行分散 處理后，采用鹽酸水解，離子色譜進行檢測。方法簡單易行，準確可靠，實 驗結(jié)果滿足檢測的要求。
測試條件：
儀器和試劑
賽默飛ics-3000離子色譜系統(tǒng)（美國dionex公司），電導(dǎo) 檢測器；自動進樣器及chromeleon色譜數(shù)據(jù)處理工作 站；miliq-element純水機（法國millipore）；kq-500e型 *（昆山市超聲儀器有限公司）；電熱恒溫水 浴鍋（北京長安科學(xué)儀器廠）；0.22 µm尼龍濾膜。 *酒石酸氫鹽（純度98.0%，日本tci試劑） ； miliq-element超純水；鹽酸（優(yōu)級純，北京化工廠）；曲 拉通x-100（化學(xué)純，西隴化工股份有限公司）；甲烷磺 酸（色譜純，sigma公司）。文中所用血樣為雞血樣品。
色譜條件
色譜柱：ionpac cs12分析柱 （250 mm×4 mm）和 ionpac cg12保護柱（50 mm×4 mm）； 淋洗液：甲烷磺酸（16 mmol/l）； 抑制器：csrs 300 4 mm ，外接水抑制模式。 進樣體積：100 µl。
樣品前處理方法：
準確稱取約2 g全血樣品（真空采樣，保存于4 ℃ 冰箱中可保持30天）于50 ml具塞玻璃錐形瓶中，加入 27.5 ml 1.0%的曲拉通-x100溶液，超聲15 min，再加 入1.5 ml鹽酸，加蓋，混勻。將錐形瓶放入70 ℃水浴 3小時，每小時搖一次。將水解產(chǎn)物冷卻至室溫，用水 沖洗錐形瓶，所得溶液過濾至容量瓶中，將濾液定容至 100 ml，此濾液可以在4 ℃下保存三天。分析前用水繼續(xù) 稀釋此濾液10倍后，過0.22 µm尼龍濾膜。同時準備試劑 空白。
結(jié)果和討論：
前處理條件的選擇
血樣不同于粉末的食品樣品，凝固后很難在水溶液中 均勻分散，會大大的影響提取效率。實驗室采用了0.5 % 曲拉通x-100溶液（一種表面活性劑）對血樣進行分散， 并且采用超聲提取以提高提取率。實驗室考察了超聲時 間（15 min、30 min、45 min、60 min）對提取效率的影 響，從圖1可以明顯的看出，當(dāng)超聲時間達到15 min后， 提取率就沒有明顯的變化，因此實驗室選擇15 min作為超 聲時間。
同時也考察了水解溶液中鹽酸的用量，選擇某血 樣，研究采用不同的鹽酸溶液配是否會影響血樣的水解 效率，不同的鹽酸配比條件采用實驗室建立的方法進行 檢測，所得結(jié)果見表1。 方法1鹽酸用量越大，所得濾液酸度較高，若直接 進樣會使陽離子交換官能團發(fā)生質(zhì)子化，色譜峰嚴重變 形，因此必須再稀釋5倍后再進樣。而采用方法2和方法 3進行前處理，所得濾液酸度就適合直接進樣分析，且已 經(jīng)滿足了水解的效果。方法3稀釋倍數(shù)增大一倍，樣液 中*的含量也能達到檢出限的要求，且溶液更容易過 濾，可以進一步提高工作效率，所以實驗室采用了方法3 的鹽酸用量進行前處理。
色譜柱的選擇
在常用的陽離子色譜柱中，ionpac cs17色譜柱同 樣可以分析血樣中的*，淋洗液濃度為6 mm的甲烷磺 酸，對于ionpac cs17色譜柱分析奶粉中的*色譜峰 對稱性更好，所用淋洗液濃度低。但鈉離子、銨離子和 鉀離子的分離度不好，并且ionpac cs17更容易發(fā)生陽 離子交換官能團的質(zhì)子化現(xiàn)象，與ionpac cs12a色譜柱 相比，前處理后的溶液需要多稀釋5倍后進樣。可能會 影響含量較低的血樣的定量。所以實驗室采用了ionpac cs12a作為檢測用色譜柱，等度淋洗。對于分離效果較 好的新的色譜柱來說，淋洗液的濃度不超過20 mmol/l 均能滿足分離的要求。由于血樣中成分較為復(fù)雜，鉀含 量較高，如果淋洗液濃度太高，鉀離子拖尾現(xiàn)象比較嚴 重，所以終采用了16 mmol/l作為淋洗液條件
結(jié)論：
本方法采用鹽酸酸解，使全血樣品中的*釋放出 來，前處理方法對*提取效率高。處理后的樣品溶液 使用ionpac cs12a色譜柱分析，抑制電導(dǎo)檢測，*色 譜峰型良好，檢測靈敏度高，且可以同時測定其他5種常 見陽離子。
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測試條件：
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色譜條件
色譜柱：ionpac cs12分析柱 （250 mm×4 mm）和 ionpac cg12保護柱（50 mm×4 mm）； 淋洗液：甲烷磺酸（16 mmol/l）； 抑制器：csrs 300 4 mm ，外接水抑制模式。 進樣體積：100 µl。
樣品前處理方法：
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