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丙型肝炎病毒PCR檢測試劑盒標準操作步驟

丙型肝炎病毒pcr檢測試劑盒標準操作步驟:
1.液氮充分研磨樣品。
2.收集研磨成粉末的50mg樣品,置于1.5ml離心管中。
3.加入350μl65℃預熱的緩沖液il,并加入20μl蛋白酶k劇烈地漩渦振蕩,確保所有的組織團都分散均勻。
4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數次。
5.加入350μl氯仿,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。
6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。
7.加入4μl rnase a,渦旋混勻。室溫放置2min。
8.加入二分之一上清體積的緩沖液ib與等體積的無水乙醇,充分混勻。如:向300μl上清中加入150μl緩沖液ib與300μl無水乙醇。
9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合dna,棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。
10.將吸附柱重新套回收集管中,加入500μl緩沖液wb至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;
11.將吸附柱重新套回收集管中,加入600μl dna wash buffer至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;
注意:dna wash buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中,使用前須恢復到室溫。
12.再加入600μl dna wash buffer至柱子中,8,000×g離心1min,棄去流出液;
13.將吸附柱重新套回2ml收集管中,轉速(>13000×g)離心空結合柱1min以干燥柱子的基質;這一步對下面的洗脫步驟至關重要。
14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管,加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液eb至柱子的膜中央。室溫靜置5min;
15. 室溫下,離心(>13000)1min,以洗脫dna。保留含dna的流出液。將dna儲于-20℃。
產品僅用于科研如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

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