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人組織多肽抗原(TPA)ELisa試劑盒使用?

本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍: 96t
5u/l - 170u/l
使用目的:
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中組織多肽抗原(tpa)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人組織多肽抗原(tpa)水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入組織多肽抗原(tpa),再與hrp標記的抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過洗后加底物tmb顯色。tmb在hrp酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的組織多肽抗原(tpa)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(od值),通過標準曲線計算樣品中人組織多肽抗原(tpa)濃度。
試劑盒組成
1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
7
終止液
6ml×1瓶
2
酶標試劑
6ml×1瓶
8
標準品(320u/l)
0.5ml×1瓶
3
酶標包被板
12孔×8條
9
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液
6ml×1瓶
10
說明書
1份
5
顯色劑a液
6ml×1瓶
11
封板膜
2張
6
顯色劑b液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1個
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含nan3的樣品,因nan3抑制辣根過氧化物酶的(hrp)活性。
操作步驟
標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
160u/l
5號標準品
150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
80u/l
4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
40u/l
3號標準品
150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
20u/l
2號標準品
150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
10u/l
1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
溫育:操作同3。
洗滌:操作同5。
顯色:每孔先加入顯色劑a50μl,再加入顯色劑b50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(od值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
操作程序總結:
計算
以標準物的濃度為橫坐標,od值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的od值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與od值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的od值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本od值大于標準品孔第一孔的od值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月
關鍵詞:酶標儀

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