冷凍保存是保存細胞或組織以備將來使用的一種重要的技術。最常見和可靠的冷凍保存方法之一是使用二甲基亞砜(dmso)作為冷凍保護劑。
為什么是dmso？
由于其在冷凍和解凍過程中保護細胞的能力，dmso被廣泛用作冷凍保護劑。它對多種細胞類型的冷凍保存有效，包括血細胞、干細胞和其他哺乳動物細胞。它可以穿透細胞膜，以防止冰晶的形成。dmso對細胞的毒性很低，但它可以溶解和滲透可能具有細胞毒性的化合物。此外，過高濃度的dmso會溶解細胞膜。當使其作為冷凍保護劑時，仍須小心。
如何使用dmso?
冷凍細胞的過程涉及幾個關鍵步驟，需要遵循這些步驟以確保細胞在解凍后保持活力。以下是一個循序漸進的指南：
1.培養：在適當的培養基中培養細胞，直到達到所需的融合度。
2.準備冷凍培養基：市場上有多種類型的冷凍培養基，為特定細胞類型選擇合適的培養基很重要。冷凍介質應含有適當濃度的dmso或其他冷凍保護劑，以在冷凍過程中保護細胞。dmso的濃度可以根據細胞類型而變化，但典型的濃度在5-10%之間。
不同類型的細胞可能需要不同的冷凍保護劑或不同濃度的dmso。其他常見冷凍保護劑包括甘油、乙二醇和血清。選擇正確的冷凍介質對成功冷凍保存細胞至關重要。在選擇冷凍介質時，重要的是要考慮細胞類型、細胞大小和膜滲透性等因素。某些細胞類型可能需要特定的添加劑或較低濃度的dmso來避免毒性。
此外，對于某些應用，無血清培養基可能是優選的，以降低污染或免疫反應的風險。確保遵循特定細胞類型的推薦方案，并選擇高質量的冷凍培養基，以確保獲得最佳效果。
3.清洗：用緩沖液清洗細胞，去除任何可能干擾冷凍保存過程的微量血清或其他污染物。
4.加入冷凍培養基：將冷凍培養基加入細胞中，輕輕混合，確保細胞被均勻覆蓋。
5.轉移容器：將細胞轉移到適當的冷凍容器，如螺旋頂部冷凍瓶。由于冷凍過程中的膨脹，建議將液體填充至小瓶體積的一半。
6.冷凍細胞：冷凍過程應緩慢進行，以盡量減少對細胞的損傷。使用速率可控的冷凍器，確保冷凍細胞的速率一致。以-1°c/min的速度冷凍細胞，直到達到-80°c。
7.儲存細胞：一旦細胞被冷凍，就可以將其儲存在液氮冷凍柜中，直到需要為止。

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