腫瘤細(xì)胞特點和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
腫瘤細(xì)胞在組織培養(yǎng)中占據(jù)較為重要地位。腫瘤細(xì)胞相對容易培養(yǎng)，腫瘤細(xì)胞系是目前建立的細(xì)胞類型中數(shù)量較多的。此外，腫瘤是人類疾病的大威脅。因此，腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)已成為了解癌癥機(jī)制和開發(fā)抗癌藥物的新技術(shù)。本指南旨在作為腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)的基本介紹，包括培養(yǎng)基、傳代培養(yǎng)、冷凍保存和污染防治。
腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性
腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)外與正常細(xì)胞在形態(tài)、生長值、遺傳性狀等方面均有顯著差異。體外培養(yǎng)的兩種腫瘤細(xì)胞定義的差異很小，但卻不相同。培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞具有以下特征：
1.不斷分化，持續(xù)生長
正常細(xì)胞的生長和死亡受到嚴(yán)格控制。細(xì)胞使用細(xì)胞外信號來調(diào)節(jié)分裂的速率和位置。一般來說，細(xì)胞凋亡可以由正常的生命程序觸發(fā)。相反，腫瘤細(xì)胞提供了一種機(jī)制，使它們能夠繞過細(xì)胞周期檢查點并抑制細(xì)胞凋亡。在癌細(xì)胞中，有絲分裂可以連續(xù)發(fā)生，產(chǎn)生過多的細(xì)胞以形成腫瘤。
2.無接觸抑制
正常細(xì)胞會分裂，直到它們與鄰近的細(xì)胞接觸，然后它們會停止生長并形成單層細(xì)胞。而癌細(xì)胞通常會失去這種接觸抑制，導(dǎo)致它們堆積并形成腫瘤。
3.侵入性
正常細(xì)胞通常位于固定位置直至死亡。但是腫瘤細(xì)胞能夠擴(kuò)散到或侵入附近的組織。此外，一些腫瘤細(xì)胞可以脫落并通過血液或淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到體內(nèi)遠(yuǎn)處，形成遠(yuǎn)離原發(fā)腫瘤的新腫瘤。
腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)原理
細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)知識現(xiàn)在相對普遍，盡管并非總是如此。細(xì)胞培養(yǎng)的主要條件是光線充足且通風(fēng)良好的實驗室，配備的實驗室儀器應(yīng)包括層流罩（ii 級）、co2培養(yǎng)箱、生物安全柜、臺式離心機(jī)、顯微鏡、塑料器皿（燒瓶和培養(yǎng)板）以及含有或不含血清補(bǔ)充劑的培養(yǎng)基.
培養(yǎng)基和血清
大多數(shù)培養(yǎng)基是添加了各種成分的基礎(chǔ)鹽水培養(yǎng)基。在這種含鹽培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加了氨基酸、維生素、金屬離子、微量元素和能量來源（通常以葡萄糖形式提供）以滿足細(xì)胞的需要。其他添加劑包括緩沖液和酚紅以指示培養(yǎng)物的酸度。
表 1. 常用培養(yǎng)基。
類型
應(yīng)用
基礎(chǔ)培養(yǎng)基(bme)
二倍體和原代細(xì)胞培養(yǎng)物，例如 hela、l 細(xì)胞和原代哺乳動物成纖維細(xì)胞
非必需培養(yǎng)基 (mem)
懸浮和貼壁哺乳動物細(xì)胞
細(xì)胞因子
保護(hù)和維持大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞的生長
細(xì)胞生長因子
人微血管內(nèi)皮細(xì)胞
rpmi 1640
大多數(shù)哺乳動物和雜瘤細(xì)胞，例如人類骨髓瘤、小鼠雜瘤、人類白細(xì)胞、b 和 t 淋巴細(xì)胞
血清通常被添加到上述培養(yǎng)基中以替代許多缺失的需求。存在的成分濃度通常在 5-20% 之間變化，具體取決于細(xì)胞類型，并且使用新生兒或胎牛血清的做法已變得很普遍。由于批次之間存在差異，因此最好堅持使用一家發(fā)現(xiàn)與特定細(xì)胞系合作良好的供應(yīng)商。血清可分成等分試樣并冷凍在-20°c。
有些細(xì)胞類型不能在含有血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，例如人微血管內(nèi)皮細(xì)胞。在現(xiàn)有的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加特定的添加劑或增加各種成分的濃度都可以滿足特殊要求。
繼代培養(yǎng)
傳代培養(yǎng)是通過將部分或全部細(xì)胞從以前的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到新鮮的生長培養(yǎng)基中而產(chǎn)生新細(xì)胞或微生物培養(yǎng)物的過程。不同的細(xì)胞類型具有特定的傳代培養(yǎng)要求、優(yōu)選的密度范圍和最佳生長的良好條件。所以更多的細(xì)節(jié)請參考我們網(wǎng)站上的具體技術(shù)公告。
冷凍保存
為了有效地儲存細(xì)胞，然后回收足夠高的比例用于質(zhì)量研究，必須監(jiān)測儲存條件并保存良好的記錄。
凍融引起的細(xì)胞損傷一般認(rèn)為是由細(xì)胞內(nèi)冰晶和滲透作用引起的。添加冷凍保護(hù)劑，如二甲基亞砜 (dmso) 或甘油，并選擇合適的冷凍和解凍速率可最大限度地減少細(xì)胞損傷。雖然可以使用機(jī)械冷凍機(jī) (-75°c) 短期儲存細(xì)胞系，但更優(yōu)選儲存在液氮 (-196°c) 或其蒸氣（至 -135°c）中。使用液氮冰箱是有利的，不僅因為較低的溫度，因此幾乎可以無限存儲時間，而且還因為沒有機(jī)械故障的風(fēng)險，并且現(xiàn)在可以延長保存時間。
細(xì)胞培養(yǎng)過程中的污染
細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)染色無菌，定期進(jìn)行無菌檢測是必要的。雖然細(xì)胞培養(yǎng)物可能在內(nèi)源性（主要是病毒）感染中產(chǎn)生，但大多數(shù)感染和污染是后天獲得的。以下是一些常見的文化污染，但不限于：
細(xì)菌
細(xì)菌是一大群普遍存在的單細(xì)胞微生物。由于它們的普遍存在、大小和快速生長速度，細(xì)菌是細(xì)胞培養(yǎng)中最常見的生物污染物之一。如果存在，通過肉眼觀察很容易檢測到酚紅會變黃，并且在倒置顯微鏡下細(xì)胞會被細(xì)菌菌落取代。向培養(yǎng)物中添加抗生素是常見的做法，這可以在相當(dāng)長的時間內(nèi)掩蓋低水平感染。
霉菌
霉菌是真菌界的真核微生物。與細(xì)菌污染不同，培養(yǎng)物的 ph 值在污染的初始階段會保持穩(wěn)定，然后隨著培養(yǎng)物受到更嚴(yán)重的感染并變得混濁而迅速升高。在顯微鏡下，通常會出現(xiàn)菌絲體。一般來說，在培養(yǎng)物中加入抗生素，就能在一定程度上降低感染程度。
酵母菌
酵母是單細(xì)胞真核微生物，類似于霉菌污染，被酵母污染的培養(yǎng)物變得渾濁，特別是如果污染處于晚期。被酵母污染的培養(yǎng)物的 ph 值可能不會變化太多，直到污染變重，在這個階段 ph 值通常會增加。在顯微鏡下，很明顯酵母表現(xiàn)為單個卵形或球形顆粒，甚至可能會長出更小的顆粒。向培養(yǎng)物中添加抗生素效果不佳。大多數(shù)實驗室通常會處理受感染的培養(yǎng)物并重新開始。
酵母污染細(xì)胞
支原體
支原體可能是細(xì)胞培養(yǎng)實驗室中最常見和最容易被遺漏的感染，其影響是陰險的。可能存在問題的指標(biāo)包括生長速度降低、形態(tài)變化、染色體畸變和新陳代謝改變。有多種檢測支原體的方法，可以使用支原體清除試劑盒進(jìn)行清除或預(yù)防。
病毒
一些細(xì)胞系包含病毒，包括整合到它們的基因組中，或作為內(nèi)源性非致死性感染。在許多情況下，這些不被視為感染，細(xì)胞的病毒轉(zhuǎn)化是產(chǎn)生連續(xù)細(xì)胞系的歷史悠久的方法。然而，使用病毒感染的細(xì)胞培養(yǎng)物會對實驗室人員造成嚴(yán)重的健康危害，尤其是在實驗室培養(yǎng)人類或靈長類動物細(xì)胞時。
蘇州阿爾法生物與海星生物深度合作提供以下產(chǎn)品與服務(wù)：
hycyte™ 干細(xì)胞、原代細(xì)胞、細(xì)胞系、三系誘導(dǎo)培養(yǎng)試劑、專用培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)基、f12培養(yǎng)基、mem培養(yǎng)基、基因編輯試劑盒、細(xì)胞株現(xiàn)貨、細(xì)胞專用血清等細(xì)胞生物學(xué)試劑。提供的服務(wù)包括：crispr-cas9細(xì)胞基因編輯、載體構(gòu)建,病毒包裝,分子量標(biāo)準(zhǔn)品，突變基因標(biāo)準(zhǔn)品，融合基因標(biāo)準(zhǔn)品，細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)，細(xì)胞干擾等服務(wù)。
蘇州阿爾法同時提供過氧化氫消毒液、季銨鹽消毒劑、復(fù)方季銨鹽消毒液、殺孢子劑、醇類消毒液、濃縮消毒液、除霉菌消毒液、無塵布、潔凈抹布、滅菌拖把等廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、制藥企業(yè)、醫(yī)藥研發(fā)、疾控防御、檢驗檢疫等多種場景。
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透明柔性自驅(qū)動觸覺傳感器研制成功
腫瘤細(xì)胞特點和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
如何選購所需細(xì)胞計數(shù)器
鍋爐軟水樹脂中鐵含量過高的處理
高低溫試驗箱試驗時對水有什么要求
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厭氧培養(yǎng)罐/產(chǎn)氣袋/指示劑
如何安全操作中走絲線切割？
ABB軟啟動器PSS系列通用型
微波消解儀出現(xiàn)過熱的原因是什么？
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炎癥小體——Caspase-1活化支架
低溫生化培養(yǎng)箱漏電如何解決呢？
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腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性
腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)外與正常細(xì)胞在形態(tài)、生長值、遺傳性狀等方面均有顯著差異。體外培養(yǎng)的兩種腫瘤細(xì)胞定義的差異很小，但卻不相同。培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞具有以下特征：
1.不斷分化，持續(xù)生長
正常細(xì)胞的生長和死亡受到嚴(yán)格控制。細(xì)胞使用細(xì)胞外信號來調(diào)節(jié)分裂的速率和位置。一般來說，細(xì)胞凋亡可以由正常的生命程序觸發(fā)。相反，腫瘤細(xì)胞提供了一種機(jī)制，使它們能夠繞過細(xì)胞周期檢查點并抑制細(xì)胞凋亡。在癌細(xì)胞中，有絲分裂可以連續(xù)發(fā)生，產(chǎn)生過多的細(xì)胞以形成腫瘤。
2.無接觸抑制
正常細(xì)胞會分裂，直到它們與鄰近的細(xì)胞接觸，然后它們會停止生長并形成單層細(xì)胞。而癌細(xì)胞通常會失去這種接觸抑制，導(dǎo)致它們堆積并形成腫瘤。
3.侵入性
正常細(xì)胞通常位于固定位置直至死亡。但是腫瘤細(xì)胞能夠擴(kuò)散到或侵入附近的組織。此外，一些腫瘤細(xì)胞可以脫落并通過血液或淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到體內(nèi)遠(yuǎn)處，形成遠(yuǎn)離原發(fā)腫瘤的新腫瘤。
腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)原理
細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)知識現(xiàn)在相對普遍，盡管并非總是如此。細(xì)胞培養(yǎng)的主要條件是光線充足且通風(fēng)良好的實驗室，配備的實驗室儀器應(yīng)包括層流罩（ii 級）、co2培養(yǎng)箱、生物安全柜、臺式離心機(jī)、顯微鏡、塑料器皿（燒瓶和培養(yǎng)板）以及含有或不含血清補(bǔ)充劑的培養(yǎng)基.
培養(yǎng)基和血清
大多數(shù)培養(yǎng)基是添加了各種成分的基礎(chǔ)鹽水培養(yǎng)基。在這種含鹽培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加了氨基酸、維生素、金屬離子、微量元素和能量來源（通常以葡萄糖形式提供）以滿足細(xì)胞的需要。其他添加劑包括緩沖液和酚紅以指示培養(yǎng)物的酸度。
表 1. 常用培養(yǎng)基。
類型
應(yīng)用
基礎(chǔ)培養(yǎng)基(bme)
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懸浮和貼壁哺乳動物細(xì)胞
細(xì)胞因子
保護(hù)和維持大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞的生長
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rpmi 1640
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血清通常被添加到上述培養(yǎng)基中以替代許多缺失的需求。存在的成分濃度通常在 5-20% 之間變化，具體取決于細(xì)胞類型，并且使用新生兒或胎牛血清的做法已變得很普遍。由于批次之間存在差異，因此最好堅持使用一家發(fā)現(xiàn)與特定細(xì)胞系合作良好的供應(yīng)商。血清可分成等分試樣并冷凍在-20°c。
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繼代培養(yǎng)
傳代培養(yǎng)是通過將部分或全部細(xì)胞從以前的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到新鮮的生長培養(yǎng)基中而產(chǎn)生新細(xì)胞或微生物培養(yǎng)物的過程。不同的細(xì)胞類型具有特定的傳代培養(yǎng)要求、優(yōu)選的密度范圍和最佳生長的良好條件。所以更多的細(xì)節(jié)請參考我們網(wǎng)站上的具體技術(shù)公告。
冷凍保存
為了有效地儲存細(xì)胞，然后回收足夠高的比例用于質(zhì)量研究，必須監(jiān)測儲存條件并保存良好的記錄。
凍融引起的細(xì)胞損傷一般認(rèn)為是由細(xì)胞內(nèi)冰晶和滲透作用引起的。添加冷凍保護(hù)劑，如二甲基亞砜 (dmso) 或甘油，并選擇合適的冷凍和解凍速率可最大限度地減少細(xì)胞損傷。雖然可以使用機(jī)械冷凍機(jī) (-75°c) 短期儲存細(xì)胞系，但更優(yōu)選儲存在液氮 (-196°c) 或其蒸氣（至 -135°c）中。使用液氮冰箱是有利的，不僅因為較低的溫度，因此幾乎可以無限存儲時間，而且還因為沒有機(jī)械故障的風(fēng)險，并且現(xiàn)在可以延長保存時間。
細(xì)胞培養(yǎng)過程中的污染
細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)染色無菌，定期進(jìn)行無菌檢測是必要的。雖然細(xì)胞培養(yǎng)物可能在內(nèi)源性（主要是病毒）感染中產(chǎn)生，但大多數(shù)感染和污染是后天獲得的。以下是一些常見的文化污染，但不限于：
細(xì)菌
細(xì)菌是一大群普遍存在的單細(xì)胞微生物。由于它們的普遍存在、大小和快速生長速度，細(xì)菌是細(xì)胞培養(yǎng)中最常見的生物污染物之一。如果存在，通過肉眼觀察很容易檢測到酚紅會變黃，并且在倒置顯微鏡下細(xì)胞會被細(xì)菌菌落取代。向培養(yǎng)物中添加抗生素是常見的做法，這可以在相當(dāng)長的時間內(nèi)掩蓋低水平感染。
霉菌
霉菌是真菌界的真核微生物。與細(xì)菌污染不同，培養(yǎng)物的 ph 值在污染的初始階段會保持穩(wěn)定，然后隨著培養(yǎng)物受到更嚴(yán)重的感染并變得混濁而迅速升高。在顯微鏡下，通常會出現(xiàn)菌絲體。一般來說，在培養(yǎng)物中加入抗生素，就能在一定程度上降低感染程度。
酵母菌
酵母是單細(xì)胞真核微生物，類似于霉菌污染，被酵母污染的培養(yǎng)物變得渾濁，特別是如果污染處于晚期。被酵母污染的培養(yǎng)物的 ph 值可能不會變化太多，直到污染變重，在這個階段 ph 值通常會增加。在顯微鏡下，很明顯酵母表現(xiàn)為單個卵形或球形顆粒，甚至可能會長出更小的顆粒。向培養(yǎng)物中添加抗生素效果不佳。大多數(shù)實驗室通常會處理受感染的培養(yǎng)物并重新開始。
酵母污染細(xì)胞
支原體
支原體可能是細(xì)胞培養(yǎng)實驗室中最常見和最容易被遺漏的感染，其影響是陰險的。可能存在問題的指標(biāo)包括生長速度降低、形態(tài)變化、染色體畸變和新陳代謝改變。有多種檢測支原體的方法，可以使用支原體清除試劑盒進(jìn)行清除或預(yù)防。
病毒
一些細(xì)胞系包含病毒，包括整合到它們的基因組中，或作為內(nèi)源性非致死性感染。在許多情況下，這些不被視為感染，細(xì)胞的病毒轉(zhuǎn)化是產(chǎn)生連續(xù)細(xì)胞系的歷史悠久的方法。然而，使用病毒感染的細(xì)胞培養(yǎng)物會對實驗室人員造成嚴(yán)重的健康危害，尤其是在實驗室培養(yǎng)人類或靈長類動物細(xì)胞時。
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實驗干貨 | 移液器發(fā)生這些情況你知道怎么做嗎？
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腫瘤細(xì)胞特點和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
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高低溫試驗箱試驗時對水有什么要求
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低溫生化培養(yǎng)箱漏電如何解決呢？
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