實時熒光定量pcr儀由熒光定量系統(tǒng)和計算機組成,可用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光,與實時設(shè)備相連的計算機收集熒光數(shù)據(jù)。
實時熒光定量pcr儀可用于病原體檢測、產(chǎn)前診斷、藥物療效考核、腫瘤基因檢測等醫(yī)療領(lǐng)域。
1、病原體檢測
目前,采用熒光定量pcr檢測技術(shù)可以對淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、結(jié)核分枝桿菌、eb病毒和巨細胞病毒等病原體進行定量測定。與傳統(tǒng)的檢測方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡便等優(yōu)點。
如:結(jié)核菌基因診斷的意義主要表現(xiàn)在:區(qū)分tb與其它分枝桿菌;檢測tb耐藥基因;提高tb的陽性檢出率。
2、產(chǎn)前診斷
到目前為止,人們對遺傳性物質(zhì)改變引起的遺傳性疾病還無法治療,只能通過產(chǎn)前監(jiān)測,減少病嬰出生,以防止各類遺傳性疾病的發(fā)生,如為減少x連鎖遺傳病患兒的出生,從孕婦的外周血中分離胎兒dna,用實時熒光定量pcr檢測其y性別決定區(qū)基因是一種無創(chuàng)傷性的方法,易為孕婦所接受。
3、藥物療效考核
對乙型肝炎病毒(hbv)、丙型肝炎病毒(hcv) 定量分析顯示:病毒量與某些藥物的療效關(guān)系。hcv高水平表達,干擾素治療作用不敏感,而hcv低滴度,干擾素作用敏感;在治療過程中,hbv-dna的血清含量曾有下降,隨后若再度上升或超出以前水平,則提示病毒發(fā)生變異。如pcr技術(shù)在hbv檢測中的應(yīng)用及意義:了解乙肝病毒在體內(nèi)存在的數(shù)量;是否復(fù)制;是否傳染,傳染性有多強;是否有必要服藥;肝功能異常改變是否由病毒引起;判斷病人是適合用哪類抗病毒的藥物;判斷藥物治療的療效。
4、腫瘤基因檢測
盡管腫瘤發(fā)病的機理尚未清楚,但相關(guān)基因發(fā)生突變是致癌性轉(zhuǎn)變的根本原因已被廣泛接受。癌基因的表達增加和突變,在許多腫瘤早期就可以出現(xiàn)。實時熒光定量pcr不但能有效地檢測到基因的突變,而且可以準確檢測癌基因的表達量。目前用此方法進行過端粒酶htert基因、慢性粒細胞性白血病wt1基因、腫瘤er基因、前列腺癌psm基因、腫瘤相關(guān)的病毒基因等多種基因的表達檢測。隨著與腫瘤相關(guān)的新基因的不斷發(fā)現(xiàn),熒光定量pcr技術(shù)將會在腫瘤的研究中發(fā)揮更大的作用。
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