總大腸菌群的測定
糞便中存在有大量的大腸菌群**，其在水體中存活時間和對氯的抵抗力等與腸道致病菌，如沙門氏菌、志賀氏菌等相似，因此將總大腸菌群作為糞便污染的指示菌是合適的。但在某些水質條件下，大腸菌群**在水中能自行繁殖。
總大腸菌群是指那些能在35℃、48小時之內使乳糖發酵產酸、產氣、需氧及兼性厭氧的、革蘭氏陰性的無芽孢桿菌，以每升水樣中所含有的大腸菌群的數目表示。
總大腸菌群的檢驗方法有發酵法和濾膜法。發酵法可用于各種水樣（包括底泥），但操作較繁瑣，費時間。濾膜法操作簡便、快速，但不適用于渾濁水樣。因為這種水樣常會把濾膜堵塞，異物也可能干擾菌種生長。
1.多管發酵法
多管發酵法是根據大腸菌群**能發酵乳糖、產酸產氣以及具備革蘭氏染色陰性、無芽胞、呈桿狀等特性進行檢驗的。其檢驗程序如下：
（1）配制培養基：檢驗大腸菌群需用多種培養基，有乳糖蛋白胨培養液、三倍濃縮乳糖蛋白胨培養液、品紅亞硫酸鈉培養基、伊紅美藍培養基。
（2）初步發酵試驗：該試驗基于大腸菌群能分解乳糖生成二氧化碳等氣體的特征，而水體中某些**不具備此特點。但是，能產酸、產氣的絕非僅屬于大腸菌群，故還需進行復發酵試驗予以證實。初步發酵試驗方法是在**操作條件下，分別取不同量水樣于數支裝有三倍濃縮乳糖蛋白胨培養液或乳糖蛋白胨培養液的試管中（內有倒管），得到不同稀釋度的水樣培養液，于37℃恒溫培養24小時。
（3）平板分離：水樣經初步發酵試驗培養24小時后，將產酸、產氣及只產酸的發酵管分別接種于品紅亞硫酸鈉培養基或伊紅美藍培養基上，于37℃恒溫培養24小時，挑選出符合下列特征的菌落，取菌落的一小部分進行涂片、革蘭氏染色、鏡檢。
品紅亞硫酸鈉培養基上的菌落：紫紅色，具有金屬光澤的菌落；深紅色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紅色，中心色較深的菌落。
伊紅美藍培養基上的菌落：深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紫紅色，中心色較深的菌落。
（4）復發酵試驗：上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，則取該菌落的另一部分再接種于裝有乳糖蛋白胨培養液的試管（內有倒管）中，每管可接種分離自同一初發酵管的*典型菌落1—3個，于37℃恒溫培養24小時，有產酸產氣者，即證實有大腸菌群存在。
（5）大腸菌群計數：根據證實有大腸菌群存在的陽性管數，查總大腸菌群數檢數表（略），報告每升水樣中的總大腸菌群數。
對不同類型的水，視其總大腸菌群數的多少，用不同稀釋度的水樣試驗，以便獲得較準確的結果。
總大腸菌群數檢驗流程歸納于圖2－43。
2.濾膜法
將水樣注入已**、放有微孔濾膜（孔徑0.45μm）的濾器中，經抽濾，**被截留在膜上，將該濾膜貼于品紅亞硫酸鈉培養基上，37℃恒溫培養24小時，對符合發酵法所述特征的菌落進行涂片、革蘭氏染色和鏡檢。凡屬革蘭氏陰性無芽孢桿菌者，再接種于乳糖蛋白胨培養液或乳糖蛋白胨半固體培養基中，在37℃恒溫條件下，前者經24小時培養產酸產氣者，或后者經6—8小時培養產氣者，則判定為總大腸菌群陽性。
由濾膜上生長的大腸菌群菌落總數和所取過濾水樣量，按下式計算1升水中總大腸菌群數：

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