近年來發(fā)展起來的在微生物檢測領(lǐng)域中一種新技術(shù)。其基本原理是將特定病原體的單抗或多抗或二抗偶聯(lián)到磁珠微球上,通過抗原抗體反應(yīng)形成磁珠一目標(biāo)病原體復(fù)合物或磁珠一一抗一目標(biāo)病原體復(fù)合物,在外部磁場磁力的作用下,將目標(biāo)病原體分離出來。目前已經(jīng)開發(fā)出了針對各種病原體的免疫磁珠,如大腸埃希菌、李斯特菌、白色念珠菌、軍團(tuán)菌等,廣泛應(yīng)用到各級科研和實(shí)驗(yàn)室。經(jīng)imbs分離出的白色念珠菌可直接在顯微鏡下檢測,檢測時(shí)間縮短至4h。im—bs還可以和其它檢測技術(shù)聯(lián)合來檢測病原菌,免疫磁珠分離得到的目標(biāo)菌可繼續(xù)用于分離培養(yǎng)使大腸埃希菌0157低檢測限由200cfu·g提高到2cfu·g~;imbs結(jié)合聚合酶鏈反應(yīng)(imbs—pcr)可對培養(yǎng)條件比較特殊的細(xì)菌如苛養(yǎng)菌、厭氧菌進(jìn)行快速檢測,肉類中的產(chǎn)毒素型產(chǎn)氣莢膜梭菌經(jīng)imbs.pcr檢測,檢測時(shí)間縮短到10h,低檢測限可達(dá)10cfu·g~,有研究者利用imbs結(jié)合實(shí)時(shí)熒光定量pcr(imbs—rt—pcr)成功檢測出了水中的輪狀病毒和草莓的諾如病毒,檢測時(shí)間大大縮短;leon—velarde等利用imb8結(jié)合酶聯(lián)檢測,大大提高了沙門菌的檢測效率。
病原微生物是指可以侵人體,在宿主中生長繁殖、釋放毒性物質(zhì)等引起機(jī)體不同程度病理變化、發(fā)生感染的微生物,包括細(xì)菌、病毒、真菌、寄生蟲、衣原體、支原體等。病原微生物檢測并非新領(lǐng)域,基于病原學(xué)證據(jù)的抗感染一直都是臨床診療的'金標(biāo)準(zhǔn)'。如果能盡早識(shí)別致病病原、啟動(dòng)恰當(dāng)?shù)目垢腥痉桨缚筛纳苹颊哳A(yù)后,尤其是重癥感染者。病原微生物檢測在感染判定中意義重大,越來越多的檢測技術(shù)引入臨床,除了傳統(tǒng)的檢測方法如涂片染色、培養(yǎng)分離、免疫學(xué)技術(shù)、核酸檢測等,還有二代測序技術(shù)(next-generationsequencing,ngs)等。
病原微生物檢測的生物化學(xué)方法:
原理:生化方法檢測病原微生物實(shí)際上是測測定微生物特異性酶。由于各種微生物所具有的系統(tǒng)不*相同,對許多物質(zhì)的分解能力亦不一致。因此可利用不同底物產(chǎn)生的不同代謝產(chǎn)物來間接檢測該微生物內(nèi)酶的有無,從而達(dá)到檢測特定微生物的目的。
辛酯酶法:快速檢測沙門氏菌。沙門氏茵能產(chǎn)生辛酯酶,這一性能是除沙門氏菌外的各屬腸杄茵科細(xì)茵所不具備的。以4-甲基傘形酮辛酯ハucap)為底物,經(jīng)沙門氏菌的辛酯酶降解后,釋放出4-甲基傘形酮(mu),在紫外燈下觀察其發(fā)出的藍(lán)色熒光。
關(guān)鍵詞:顯微鏡
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