一種常用抗原的修復方法介紹
[一種常用抗原的修復方法介紹]用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織切片：1)抗原熱修復可根據實驗室的具體條件，選用微波爐抗原修復、高壓鍋抗原修復或水浴高溫抗原修復。抗原熱修復可選用各種緩沖液，如tbs、pbs、重金屬鹽溶液等，但實驗證明，以0.01m枸櫞酸鹽緩沖液(ph6.[抗原修復修復方法切片抗原緩沖液]
用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織切片：1)抗原熱修復 可根據實驗室的具體條件，選用微波爐抗原修復、高壓鍋抗原修復或水浴高溫抗原修復。抗原熱修復可選用各種緩沖液，如tbs、pbs、重金屬鹽溶液等，但實驗證明，以0.01m枸櫞酸鹽緩沖液(ph6.0)效果。請選用我公司提供的zli-9064 枸櫞酸鹽緩沖液(粉劑)配制，取該粉劑一包溶于1000ml的蒸餾水中，混勻，其ph值在6.0 ± 0.1，如因蒸餾水本身造成的ph值偏差，請自行調整。
(1)高壓熱修復 切片脫蠟至水。將1500ml~3000ml的0.01m*緩沖溶液(ph6.0，工作液)或0.001medta(ph8.0)注入不銹鋼壓力鍋中加熱至沸騰。切片置于金屬架上，放入鍋內，使切片位于液面以下，蓋鍋壓閥。當壓力鍋開始慢慢噴氣時(約加熱5~6分鐘后)，計時1~2分鐘，然后將壓力鍋端離熱源，冷水沖至室溫后，取下氣閥，打開鍋蓋，取出切片，蒸餾水洗后，pbs洗2分鐘×3，下接免疫組化染色步驟。
(2)煮沸熱修復 切片脫蠟至水后，放入盛有0.01m*緩沖溶液(ph6.0，工作液)的容器中，并將此容器置于盛有一定數量自來水的大器皿中，電爐上加熱煮沸，從小容器的溫度到達92℃~98℃起開始計時15~20分鐘，然后端離電爐，室溫冷卻20~30分鐘，蒸餾水沖洗，pbs洗，
(3)微波熱修復。切片脫蠟至水后，3%h2o2處理10分鐘，蒸餾水洗2分鐘×3。將切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液(工作液)的容器中，置微波爐內加熱使容器內液體溫度保持在92℃~98℃之間并持續10~15分鐘(注意：無論是使用醫用或家用微波爐，請根據具體機型酌情設置條件，務必滿足以上步驟中對溫度和時間的要求)。取出容器，室溫冷卻10~20分鐘(注意：不可將切片從緩沖液中取出冷卻，以便使蛋白能夠恢復原有的空間構型)。pbs洗，下接免疫組化染色步驟。
適用的抗原有：ar，bax，bcl-2，c-fos，x-jun，c-kit，c-myc，e-cadherin，chromogranin a，cyclin，er，heat shock protein，hpv，ki-67，mdmz，p53，p34，p16，p15，p-glycoprotein，pkc，pr，pcna，ras，rb，topoismeraseⅱ等。酶消化方法 常用0.1%*和0.4%*液。*使用前預熱至37℃，切片也預熱至37℃，消化時間約為5~30分鐘(*的zui終濃度可以根據使用者的要求進行調整，濃度范圍可以從0.05%至0.25%); *消化37℃時間為30分鐘。皂素(saponin)：一般使用濃度為2~10mg/ml的saponin溶液，消化時間為室溫孵育30分鐘。 適用于被固定遮避的抗原，其中有：collagen，complement，cytokeratin，c-erb-2，gfap，lca，ln等。

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