液相色譜柱的分類:(按色譜固定相基質分)
一.硅膠基質:
1.反相色譜柱:
反相色譜填料常是以硅膠為基礎,表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。
反相色譜所使用的流動相極性較強,通常為水,緩沖液與甲醇,已腈等混合物。
樣品流出色譜柱的順序是極性較強組合先被沖出,而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。
常用的反相填料有c18(ods)、c8(mos)、c4(b)、c6h5(phenyl)等。
2.正相色譜:
正相色譜用的固定相通常為硅膠(silica),以及其他具有極性官能團,如胺基團(nh2,aps)和氰基團(cn,cps)的鍵合相填料。
由于硅膠表面的硅羥基(sioh)或其他團的極性較強,因此,分離的次序是依據樣品中的各組份的極性大小,即極性強弱的組份先被沖洗出色譜柱。
正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,如:正乙烷(hexane),氯仿(chloroform),二氯甲烷(methylene chloride)等。
3.離子交換色譜柱:以磺化交聯強陰/陽離子鍵合硅膠色譜柱,常用規格:強陰離子色譜柱(sax),強陽離子交換色譜柱(scx)
二 .聚合物基質:
聚合物調料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要優點是在ph值為1~14均可使用。相對與硅膠基質的c18填料,這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白質等樣品的分離非常有效?,F在的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料,色譜柱柱效較低。
三.其他無機填料:
其它hplc的無機填料色譜柱也已經商品化。由于其特殊的性質,一般于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐漸成為反相色譜填料。這種填料的分離不同與硅膠基質烷基鍵合相,石墨化碳的表面即是保留的基礎,不再需其它的表面改性,該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強,石墨化碳可用于分離某些幾何導構體,又由于hplc流動相中不會被溶解,這類柱可在任何ph與溫度下使用。氧化鋁也可用于hplc,
氧化鋁微粒剛性強,可制成穩定的色譜柱柱床,其優點是可在ph高達12的流動相中使用。
但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強,應用范圍受到一定的限制,所以未能廣泛應用,新型氧化鋯填料也可用于hplc,商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應用ph范圍1~14,溫度可達100℃。由于氧化鋯填料幾年才開始研究,加之面臨的實驗難度,其重要用途與優勢尚在進行中。
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