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人窖蛋白(Cav-1)免疫組化試劑盒?實驗步驟

人窖蛋白(cav-1)免疫組化試劑盒實驗步驟(建議方案):
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次(即二甲苯ⅰ、ⅱ、ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇5min,95%乙醇2 次(每次2min),85%
乙醇2 min;75%乙醇2min,自來水沖洗,ddh2o 洗2×2min;
4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫度達到98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddh2o 洗2×2min,tbs 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見附1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),直接進入第5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑b,37℃濕盒孵育30 min;
6.加一抗:滴加用試劑c(即用型一抗),37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過夜;
7.洗滌: tbs-t 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑b,37℃濕盒孵育10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的*化二抗(試劑d),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: tbs-t 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑tween 20,37℃濕盒孵育封閉20 min;
12.加hrp-sa: 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑e(1:50~200,終濃度5~20 nm),37℃濕盒中孵育30 min;
13.洗滌: tbs-t 洗滌(3×5 min),tbs 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應(yīng)用dab 溶液(試劑f)顯色;
15.復(fù)染:自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
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