多酚氧化酶測試盒的粗酶液提取
（多酚氧化酶polyphenol oxidase，ppo，分光光度測定法）
一、測定原理：
多酚氧化酶能夠催化底物酚產生醌，后者在420nm處有特
征性光吸收。
二、測定意義：
ppo主要存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是一種
含銅的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化產生醌，從而引起褐化，
與果蔬加工、茶葉品質等密切相關；同時酚類物質對病原微生物
有抑制和殺傷作用，具有一定的抗病能力。
三、試劑盒組成(50t/24樣)：
四、自備儀器或用品：
可見光分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、
1cm光徑比色皿、研缽、蒸餾水、冰。
五、粗酶液提取:
1、組織樣本：組織稱重（g）：提取液體積（ml）為1:5或
1:10的比例（例如取0.2g組織，加1ml提取液或0.1g
組織加1ml提取液），進行冰浴勻漿；8000轉/分鐘常溫
離心10min（或4000轉/分鐘離心10min后取上清再4000
轉/分鐘離心10min），取上清待測（取部分上清液于90℃
以上沸水浴中反應5min作為除非處理的粗酶液上清）。
2、血清（漿）或果汁樣本：取血清（漿）或果汁體積（ml）：
提取液體積（ml）為1:4或1：9的比例（例如取0.2ml
血清（漿）或果汁加入0.8ml提取液，或者取0.1ml血
清（漿）或果汁加入0.9ml提取液），渦旋混勻抽提1min；
8000轉/分鐘常溫離心10min（或4000轉/分鐘離心10min
后取上清再4000轉/分鐘離心10min），取上清待測（取
出部分上清液于90℃以上沸水浴中反應5min作為除非
處理的粗酶液上清）。
3、細菌或培養細胞：可用稱重法或細胞計數法,詳情參考注
意事項。
八、注意事項:
1、細菌或細胞樣本前處理：a:稱重法：提取時可以先取離心
管用萬分之一天平稱重，再收集細菌或細胞到離心管內，
1000轉/分鐘離心5min后棄上清，再次稱重，減去空離心
管重量，再按2（mg）：1000（μl）或1（mg）：1000（μl）
的比例加入提取液，超聲破碎（冰浴，功率20%或200w，
超聲3s、間隔10s，重復30次），8000轉/分鐘4℃離心
10min，取上清待測，結果按照組織計算方法計算；b：細
胞個數法：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；
按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積為500～1000:1
的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲
波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20%或200w，超聲3s、
間隔10s，重復30次）；8000轉/分鐘常溫離心10min，取
上清待測
2、粗酶液提取完，吸出一部分在90℃以上水浴中煮沸5min，
取出流水冷卻，作為對照管煮沸的上清用。
3、試劑一在使用前先混勻使其分散后，再吸取進行提取。
4、本實驗組織/細胞樣本用試劑一提取很重要，提取后的粗酶
液除了測定蛋白以外，不能用于測定其他指標，以防止產
生干擾。
多酚氧化酶測試盒的粗酶液提取
關鍵詞：分光光度計 臺式離心機 水浴鍋 移液器

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