怎樣選擇適合你實驗需要的抗體?現在來介紹常用抗體一抗二抗選擇要點:
1. 一抗選擇要點:
1. 確定抗體的名字。注意中英文名字、它名、亞型等信息。
2. 確定你的實驗類型。elisa,wb,ihc,icc,還是facs。一般抗體的說明書都會列出該抗體經驗證過適用于何種實驗的類型,如果抗體說明書沒有提及的應用類型,并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型,而僅是說明尚未經過此種實驗驗證,請根據說明書列出的已驗證的類型來選擇適合你實驗的抗體。
3. 確定實驗樣本的種屬。human,mouse,還是rat。一般抗體說明書都列出該抗體經試驗驗證過適用于何種物種實驗,請根據說明書列出已驗證的種屬來選擇適合你實驗的抗體。
4. 樣本蛋白的結構性質。了解樣本蛋白的結構性質有助于選擇最合適的抗體,待測樣本蛋白的結構域和樣本在提取和處理過程中是否會變性,蛋白空間構象的改變,會影響抗體的免疫親和反應。
5.單多克隆抗體的選擇。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主,一般單克隆抗體特異性強,但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強,靈敏度高,但易出現非特異性染色(可以通過封閉等避免)。
二抗選擇要點:
1.種屬來源。主要根據一抗種屬來源來決定購買二抗來源,如一抗是小鼠來源,那二抗就買抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
2.標記物的選擇。有hrp、biotin、熒光素等標記物。一般sp三步法二抗選擇biotin標記的二抗,以與后面的sp結合反應,而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標記的二抗,如羅丹明、fitc、cy3等常用熒光素。
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