通用名：口蹄疫o型抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
英文名：test kit for antibodies to foot and mouth disease virus asia o（elisa）
【包裝規格】 96t×1/盒、96t×2/盒、96t×5/盒
【預期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus，fmdv）引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，其特征為口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚發生水泡和爛斑。
本試劑用于檢測牛、羊、豬血清中口蹄疫o型抗體，可用于口蹄疫o型疫苗免疫效果評價。
【原 理】
本試劑盒由預包被口蹄疫o型抗體的酶標板、抗體工作液、抗原液、酶標記物及其他配套試劑組成，應用阻斷酶聯免疫法（elisa）原理檢測牛、羊、豬血清樣本中口蹄疫o型抗體。實驗時將稀釋的樣本與抗原液同時加入酶標板中孵育，樣本中的抗體與酶標板上的抗體競爭抗原，阻斷抗原與板的結合；經洗滌后，再加抗體工作液孵育；經洗滌后加入酶標記物孵育；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加底物液，與酶標結合物反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有口蹄疫o型抗體。
【試劑盒組成】
序號
名稱
規格/96t×1
規格/96t×2
規格/96t×5
1
酶標記物
6ml×1(紅蓋)
11ml×1(紅蓋)
26ml×1(紅蓋)
2
抗體工作液
6ml×1(藍蓋)
11ml×1(藍蓋)
26ml×1(藍蓋)
3
抗原液
6ml×1(黑蓋)
11ml×1(黑蓋)
26ml×1(黑蓋)
4
20x濃縮洗滌液
40ml×1(白蓋)
40ml×2(白蓋)
200ml×1(白蓋)
5
底物液a
6ml×1(白蓋)
11ml×1(白蓋)
26ml×1(白蓋)
6
底物液b
6ml×1(黑蓋)
11ml×1(棕蓋)
26ml×1(黑蓋)
7
終止液
6ml×1(黃蓋)
11ml×1(黃蓋)
26ml×1(黃蓋)
8
陽性對照
1.0 ml×1(紅蓋)
1.5 ml×1(紅蓋)
2.0 ml×1(紅蓋)
9
陰性對照
1.0 ml×1(綠蓋)
1.5 ml×1(綠蓋)
2.0 ml×1(綠蓋)
10
酶標板
96t×1
96t×2
96t×5
11
蓋板膜
1
2
5
12
自封袋
1
1
2
13
說明書
1
1
1
14
稀釋板
1
2
5
【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.用工作洗滌液將待檢牛、羊血清先按32倍稀釋（如5μl血清加入155μl工作洗滌液中，混勻），待檢豬血清按16倍稀釋（如5μl血清加入75μl洗滌液中，混勻），陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條，設陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl，樣品孔每孔先加入工作洗滌液25μl，再加入稀釋后的樣品25μl；最后都加入抗原液50μl。
注：加入抗原后牛、羊樣本稀釋比例相當于1:128，豬樣本稀釋比例相當于1:64。
4.震蕩混勻10秒，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水浴）避光反應30分鐘。
5.甩去孔內液體，每孔加350μl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，最后一次拍干。
6.每孔加抗體工作液50μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔加酶標記物50μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。
9.洗滌，同步驟5。
10.每孔依次加底物液a、底物液b各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應15分鐘
11.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（a值）。
【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照a值≥0.8，陽性對照a值≤50%×陰性對照a值。
【檢驗結果的解釋】
1.pi（阻斷率）=（1- 陰性對照平均a值(樣本a值)）×100%，pi≥50%為陽性；pi＜50%為陰性。
2.本實驗檢測牛、羊血清結果為陽性時表明待檢樣本中含有口蹄疫o型抗體，且效價高于1:128，達到保護水平；反之檢測結果為陰性時表明待檢樣本中不含有口蹄疫o型抗體，或效價低于1:128，未達到充足保護水平。
3.本實驗檢測豬血清結果為陽性時表明待檢樣本中含有口蹄疫o型抗體，且效價高于1:64，達到保護水平；反之檢測結果為陰性時表明待檢樣本中不含有口蹄疫o型抗體，或效價低于1:64，未達到充足保護水平。
4.如需了解樣本抗體的最終效價，可將樣本進行梯度稀釋，使pi≥50%的最高稀釋比例即為該樣本抗體的最終效價。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性牛、羊、豬血清中口蹄疫o型抗體，根據pi值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。
該試劑盒不適用于合成肽疫苗免疫抗體效價評估。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以wan全溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。
關鍵詞：酶標儀 恒溫設備 移液器

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