一種Co-IP的代替方法 ----15min出結(jié)果的神秘！
一種co-ip的代替方法
----15min出結(jié)果的神秘！
分子間相互用是細(xì)胞接受信號和傳遞信號的基礎(chǔ)，是研究藥物作用的本質(zhì)所在，因此研究分子間的相互作用對于揭示生命起源、細(xì)胞病變、藥物開發(fā)等是不可忽視的過程，也是當(dāng)前生命科學(xué)與醫(yī)藥領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)；傳統(tǒng)研究分子相互作用的方法眾多，包括酵母雙雜、噬菌體展示、elisa、western、fret、co-ip、pulldown及無標(biāo)記spr 技術(shù)，在目前所有標(biāo)記技術(shù)中co-ip 實(shí)驗(yàn)比較常用，其可以直接分析來自體內(nèi)的特定蛋白之間是否存在相互作用，但是具有很多局限性且實(shí)驗(yàn)效率低。相比之下，實(shí)時(shí)無標(biāo)記spr技術(shù)作為研究分子互作的新秀，在分子互作研究中具有諸多優(yōu)勢！
下面我們具體聊聊co-ip與spr之間的差別：
免疫共沉淀（co-immunoprecipitation），簡稱 co-ip，是體外利用特定抗體沉淀相應(yīng)抗原，并將與該抗原相互結(jié)合的其他分子共同沉淀的方法，之后通過western 雜交鑒定與抗原相互作用的蛋白，也可與質(zhì)譜聯(lián)用，主要用于研究蛋白質(zhì)相互作用。可用于確定特定蛋白在天然狀態(tài)下的結(jié)合情況，也可通過質(zhì)譜找到未知蛋白。
co-ip實(shí)驗(yàn)流程圖
co-ip技術(shù)中，由于手動(dòng)步驟較多，因次實(shí)驗(yàn)會受到操作者的影響；
且具有以下局限性：
1.早期的瓊脂糖beads因顆粒小，離心后容易被攪動(dòng)起來，因此wash步驟很 難掌控。
2.beads損失或殘留多余液體，會使靶蛋白損失或產(chǎn)生假陽性信號。
3.孵育時(shí)間過長導(dǎo)致雜蛋白進(jìn)入beads孔隙被洗脫出來，影響背景。
4.對于親和力低的瞬間的蛋白與蛋白的互作不易檢測到。
5.實(shí)驗(yàn)過程繁瑣，耗時(shí)將近兩天。
6.重復(fù)性差，很難取得重復(fù)性結(jié)果。
spr 技術(shù)即表面等離子技術(shù)，采用實(shí)時(shí)無標(biāo)記的檢測方式，倍受科學(xué)家們的青睞；來自nicoya的下一代spr技術(shù)即lspr 技術(shù)（local surface plasmonresonance）即局域表面等離子共振技術(shù)，基于納米金顆粒的檢測技術(shù)，通過檢測溶液中的分子與固定到芯片表面配體結(jié)合時(shí)引起的光的吸收峰的變化，分析分子之間的相互作用，只需保證配體和分析物有一個(gè)是純的物質(zhì)，即可像co-ip 一樣分析特定蛋白天然狀態(tài)下的結(jié)合情況，并且同樣可以和質(zhì)譜聯(lián)用，分析結(jié)合相中的未知蛋白，幫助快速找到靶標(biāo)，在分子互作研究領(lǐng)域脫穎而出。
spr 技術(shù)檢測蛋白分子互作時(shí)，只需通過簡單的幾個(gè)步驟，如只需將蛋白x的抗體固定到芯片上，之后注入蛋白x即可將其沉淀下來，并同時(shí)與 x 在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì) y 或者 z 等也能共同被沉淀下來。并利用雙抗夾心法驗(yàn)證y或z 蛋白，時(shí)間只需15min，也可洗脫分析相上質(zhì)譜、測序儀分析未知的蛋白或核酸，將傳統(tǒng)co-ip 2天的實(shí)驗(yàn)縮短到15min，并且還可獲得跟多數(shù)據(jù)如動(dòng)力學(xué)參數(shù)，評估蛋白活性、表達(dá)量、相互作用強(qiáng)弱等；且檢測樣本類型涵蓋多肽，抗體，核酸，適配體，納米材料，小分子等相互作用的動(dòng)力學(xué)分析。
在spr技術(shù)中，無需微珠，無需標(biāo)記，也不必?fù)?dān)心操作原因引起實(shí)驗(yàn)失敗；檢測靈敏度高，獲得的動(dòng)力學(xué)參數(shù)可做更深入的機(jī)制分析，相對co-ip 具有很多的優(yōu)勢：
spr優(yōu)勢：
1. 操作步驟簡單，無需電泳、轉(zhuǎn)膜等繁瑣步驟
2. 檢測周期短：15min出結(jié)果
3. 無需標(biāo)記、實(shí)時(shí)結(jié)果檢測
4. 實(shí)驗(yàn)人為因素小，重復(fù)性高
5. 多數(shù)據(jù)獲取：動(dòng)力學(xué)參 ka,kd,kd
綜合比較spr與co-ip實(shí)驗(yàn)：
相同點(diǎn)：
（1）測定兩種甚至更多種蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；
（2）鑒定一種特定蛋白質(zhì)的作用搭檔；
（3）分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。
傳統(tǒng)spr技術(shù)的儀器使用復(fù)雜，讓很多老師望而卻步，加拿大nicoya公司的下一代的lspr技術(shù)系統(tǒng)openspr，其以操作簡單但不失精確結(jié)果的優(yōu)勢正逐漸占領(lǐng)市場，且lspr的成本甚至低于co-ip，并在實(shí)驗(yàn)周期和重復(fù)性上具有很大優(yōu)勢。
自我們普瑞麥迪2016年8月正式引進(jìn)到中國后，全國高校爭先試用，目前清華，北大，中科院，二軍大、上海交大、西安交大、南京大學(xué)、軍科院、四川大學(xué)、西南大學(xué)等都已試用，并取得良好的反響和申報(bào)計(jì)劃。武漢大學(xué)、山東大學(xué)、北大腫瘤醫(yī)院、西南大學(xué)等已成功申購我們的openspr。
值得您期待的精彩，不容錯(cuò)過！
普瑞麥迪（北京）實(shí)驗(yàn)室技術(shù)有限公司
： : service
電話： ：-8002
更多信息請關(guān)注微信公眾賬號：普瑞麥迪
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淺談清潔度萃取設(shè)備的重要性
工地防塵遮陽網(wǎng)寬度規(guī)格
污水處理設(shè)備深度處理方法
關(guān)于潛水?dāng)嚢铏C(jī)安裝詳解
靜電計(jì)測試儀技術(shù)參數(shù)
二手不銹鋼儲罐冬天如何防凍
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1.早期的瓊脂糖beads因顆粒小，離心后容易被攪動(dòng)起來，因此wash步驟很 難掌控。
2.beads損失或殘留多余液體，會使靶蛋白損失或產(chǎn)生假陽性信號。
3.孵育時(shí)間過長導(dǎo)致雜蛋白進(jìn)入beads孔隙被洗脫出來，影響背景。
4.對于親和力低的瞬間的蛋白與蛋白的互作不易檢測到。
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