操作步驟丨皮質(zhì)醇ELISA試劑盒簡(jiǎn)單精準(zhǔn)定量
皮質(zhì)醇elisa試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心elisa法定量測(cè)定其他血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體中皮質(zhì)醇含量。
艾美捷皮質(zhì)醇elisa試劑盒#k003-h1：
檢測(cè)范圍：0.375nmol/l~12nmol/l
靈敏度：0.1
實(shí)驗(yàn)原理：將皮質(zhì)醇(cor)抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的皮質(zhì)醇(cor)與連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入生物素化的皮質(zhì)醇(cor)抗體，將未結(jié)合的生物素化抗體洗凈后，加入hrp標(biāo)記的親和素，再次徹-底洗滌后加入tmb底物顯色。tmb在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的皮質(zhì)醇呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(0.d.值),計(jì)算樣品濃度。
皮質(zhì)醇elisa試劑盒組分：
皮質(zhì)醇elisa試劑盒需自備的設(shè)備及試劑：
1. 450±10m濾光片的酶標(biāo)儀(建議儀器使用前提前預(yù)熱)
2.單道或多道微量加液器及吸頭
3.稀釋樣品的印管
4.蒸餾水或去離子水
5.吸水紙
6.盛放洗液的容器
試劑盒的儲(chǔ)存及有效期：
1.未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存。請(qǐng)注意，收到試劑盒后請(qǐng)盡快將tmb洗滌液，終止液保存于4℃,其他試劑保存于-20℃。
2.使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存，開封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20°℃,避免潮濕。
注意：
試劑盒內(nèi)酶標(biāo)條可拆卸，按實(shí)驗(yàn)需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在*實(shí)驗(yàn)后1個(gè)月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過期時(shí)間以盒子上的標(biāo)簽為準(zhǔn)，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。
皮質(zhì)醇elisa試劑盒標(biāo)本的采集與保存：
1.血清：
將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4°℃過夜，然后1000×g離心20分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80°℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.血漿：
用edta或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8°℃1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20°℃或-80°℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.組織勻漿：
1)取適量組織塊，于預(yù)冷pbs(0.01mol/l.ph 7.0-7.2)中清洗去除血液，稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);
2)可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10ml預(yù)冷pbs進(jìn)行充分研磨，該過程需在冰上進(jìn)行(有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫；反復(fù)凍融法可重復(fù)2次)。
3)將制備好的勻漿液于5000×g離心5分鐘，留取上清即可檢測(cè)。
4.細(xì)胞裂解液：
1)貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化，離心收集細(xì)胞(懸浮細(xì)胞可直接離心收集);
2)將收集到的細(xì)胞用冷pbs洗3次；
3)物理方法裂解細(xì)胞(可先超聲破碎細(xì)胞，再反復(fù)凍融):
i超聲破碎：取適量pbs重懸細(xì)胞，用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂。
ii反復(fù)凍融：將待破碎的細(xì)胞在-200c以下冰凍，室溫融解，反復(fù)3次，使細(xì)胞溶脹破碎。
4)將標(biāo)本于2-8 °℃1500×g離心10分鐘，收集上清備用。
5.細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它生物標(biāo)本：
請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20°℃或-80°℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注意：
1.以上標(biāo)本均需密封保存，4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃不應(yīng)超過1個(gè)月，-80°℃不應(yīng)超過2個(gè)月。
2.標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。
3.實(shí)驗(yàn)前紅細(xì)胞裂解液必須用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋。
皮質(zhì)醇elisa試劑盒試劑準(zhǔn)備
1.使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-250c),試劑不能直接在370c溶解。
2.標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為1000ng/ml。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的印管，每個(gè)ep管中加入150μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/ml)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3.濃洗滌液：用580ml蒸餾水或去離子水將20ml濃洗滌液稀釋至600ml,進(jìn)行30倍稀釋。
皮質(zhì)醇elisa試劑盒操作步驟：
1.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μ1,待測(cè)樣品孔中先加樣品
稀釋液40μ1,然后再加待測(cè)樣品10μ (樣品*終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
2.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
3.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
5.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μ1,空白孔除外。
6.溫育：操作同3。
7.洗滌：操作同5。
8.顯色：每孔先加入顯色劑a50μ1,再加入顯色劑b50μ1,輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。
9.終止：每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
10.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(0d值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
特異性
本試劑盒用于檢測(cè)皮質(zhì)醇(cor),經(jīng)檢測(cè)與其它相似物質(zhì)無明顯交叉反應(yīng)。
由于受到技術(shù)及樣本來源的限制，不可能完成對(duì)所有相關(guān)或相似物質(zhì)交叉反應(yīng)檢測(cè)，因此本試劑盒有可能與未經(jīng)檢測(cè)的其它物質(zhì)有交叉反應(yīng)。
精密度
精密度用樣品測(cè)定值的變異系數(shù)cv表示。cv(%)= sd/mean×100
批內(nèi)差：取同批次試劑盒對(duì)低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量檢測(cè).每份樣本連續(xù)測(cè)定20次，分別計(jì)算不同濃度樣本的平均值及sd值。
批間差：選取3個(gè)不同批次的試劑盒分別對(duì)低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量測(cè)定，每個(gè)樣本使用同一試劑盒重復(fù)測(cè)定8次，分別計(jì)算不同濃度樣本的平均值及sd值。
批內(nèi)差：cv<10%
批間差：cv<12%
皮質(zhì)醇elisa試劑盒穩(wěn)定性：
經(jīng)測(cè)定，試劑盒在有效期內(nèi)按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。
為減小外部因素對(duì)試劑金破壞前后檢測(cè)值的影響，實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境條件需盡量保持一致，尤其是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實(shí)驗(yàn)員來進(jìn)行操作可減少人為誤差。
常用**方法
天津網(wǎng)絡(luò)醫(yī)院健康小屋
移動(dòng)排澇泵車自吸能力強(qiáng)、耐干轉(zhuǎn)、流量范圍大
【軸承】通過提升油封密封性，改善鋼鐵軋機(jī)驅(qū)動(dòng)軸性能
SF6密度繼電器校驗(yàn)儀主要功能及特點(diǎn)
操作步驟丨皮質(zhì)醇ELISA試劑盒簡(jiǎn)單精準(zhǔn)定量
自動(dòng)駕駛汽車量產(chǎn)：“共享出行”或成商用爆點(diǎn)
班產(chǎn)2萬塊至20萬塊油炸方便面加工生產(chǎn)線設(shè)備在選型時(shí)注意的事項(xiàng)
德國buehler SM-6型流量計(jì)五個(gè)使用注意事項(xiàng)
輸液器導(dǎo)管流量測(cè)試儀/品質(zhì)可靠
暗桿楔式閘閥的閥板脫落預(yù)防和應(yīng)急修復(fù)
hiraceramics研磨分散用氧化鋁球產(chǎn)品特性分析
二氧化碳激光打標(biāo)機(jī)在使用過程中應(yīng)該注意什么
如何才能做好油缸防塵罩的防漏工作？
對(duì)流傳熱干燥設(shè)備 適用于那些方面
要環(huán)境，還是要發(fā)展？從環(huán)保角度看中國企業(yè)發(fā)展
河南駐馬店西門子一級(jí)供應(yīng)商
什么是管型母線?管型母線的設(shè)計(jì)和布局
行標(biāo)《綜合交通運(yùn)行監(jiān)測(cè)客運(yùn)信息數(shù)據(jù)交換》發(fā)布
漿液循環(huán)泵積漿液處理是什么樣的呢？
艾美捷皮質(zhì)醇elisa試劑盒#k003-h1：
檢測(cè)范圍：0.375nmol/l~12nmol/l
靈敏度：0.1
實(shí)驗(yàn)原理：將皮質(zhì)醇(cor)抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的皮質(zhì)醇(cor)與連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入生物素化的皮質(zhì)醇(cor)抗體，將未結(jié)合的生物素化抗體洗凈后，加入hrp標(biāo)記的親和素，再次徹-底洗滌后加入tmb底物顯色。tmb在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的皮質(zhì)醇呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(0.d.值),計(jì)算樣品濃度。
皮質(zhì)醇elisa試劑盒組分：
皮質(zhì)醇elisa試劑盒需自備的設(shè)備及試劑：
1. 450±10m濾光片的酶標(biāo)儀(建議儀器使用前提前預(yù)熱)
2.單道或多道微量加液器及吸頭
3.稀釋樣品的印管
4.蒸餾水或去離子水
5.吸水紙
6.盛放洗液的容器
試劑盒的儲(chǔ)存及有效期：
1.未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存。請(qǐng)注意，收到試劑盒后請(qǐng)盡快將tmb洗滌液，終止液保存于4℃,其他試劑保存于-20℃。
2.使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存，開封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20°℃,避免潮濕。
注意：
試劑盒內(nèi)酶標(biāo)條可拆卸，按實(shí)驗(yàn)需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在*實(shí)驗(yàn)后1個(gè)月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過期時(shí)間以盒子上的標(biāo)簽為準(zhǔn)，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。
皮質(zhì)醇elisa試劑盒標(biāo)本的采集與保存：
1.血清：
將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4°℃過夜，然后1000×g離心20分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80°℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.血漿：
用edta或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8°℃1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20°℃或-80°℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.組織勻漿：
1)取適量組織塊，于預(yù)冷pbs(0.01mol/l.ph 7.0-7.2)中清洗去除血液，稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);
2)可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10ml預(yù)冷pbs進(jìn)行充分研磨，該過程需在冰上進(jìn)行(有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫；反復(fù)凍融法可重復(fù)2次)。
3)將制備好的勻漿液于5000×g離心5分鐘，留取上清即可檢測(cè)。
4.細(xì)胞裂解液：
1)貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化，離心收集細(xì)胞(懸浮細(xì)胞可直接離心收集);
2)將收集到的細(xì)胞用冷pbs洗3次；
3)物理方法裂解細(xì)胞(可先超聲破碎細(xì)胞，再反復(fù)凍融):
i超聲破碎：取適量pbs重懸細(xì)胞，用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂。
ii反復(fù)凍融：將待破碎的細(xì)胞在-200c以下冰凍，室溫融解，反復(fù)3次，使細(xì)胞溶脹破碎。
4)將標(biāo)本于2-8 °℃1500×g離心10分鐘，收集上清備用。
5.細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它生物標(biāo)本：
請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20°℃或-80°℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注意：
1.以上標(biāo)本均需密封保存，4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃不應(yīng)超過1個(gè)月，-80°℃不應(yīng)超過2個(gè)月。
2.標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。
3.實(shí)驗(yàn)前紅細(xì)胞裂解液必須用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋。
皮質(zhì)醇elisa試劑盒試劑準(zhǔn)備
1.使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-250c),試劑不能直接在370c溶解。
2.標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為1000ng/ml。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的印管，每個(gè)ep管中加入150μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/ml)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3.濃洗滌液：用580ml蒸餾水或去離子水將20ml濃洗滌液稀釋至600ml,進(jìn)行30倍稀釋。
皮質(zhì)醇elisa試劑盒操作步驟：
1.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μ1,待測(cè)樣品孔中先加樣品
稀釋液40μ1,然后再加待測(cè)樣品10μ (樣品*終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
2.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
3.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
5.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μ1,空白孔除外。
6.溫育：操作同3。
7.洗滌：操作同5。
8.顯色：每孔先加入顯色劑a50μ1,再加入顯色劑b50μ1,輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。
9.終止：每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
10.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(0d值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
特異性
本試劑盒用于檢測(cè)皮質(zhì)醇(cor),經(jīng)檢測(cè)與其它相似物質(zhì)無明顯交叉反應(yīng)。
由于受到技術(shù)及樣本來源的限制，不可能完成對(duì)所有相關(guān)或相似物質(zhì)交叉反應(yīng)檢測(cè)，因此本試劑盒有可能與未經(jīng)檢測(cè)的其它物質(zhì)有交叉反應(yīng)。
精密度
精密度用樣品測(cè)定值的變異系數(shù)cv表示。cv(%)= sd/mean×100
批內(nèi)差：取同批次試劑盒對(duì)低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量檢測(cè).每份樣本連續(xù)測(cè)定20次，分別計(jì)算不同濃度樣本的平均值及sd值。
批間差：選取3個(gè)不同批次的試劑盒分別對(duì)低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量測(cè)定，每個(gè)樣本使用同一試劑盒重復(fù)測(cè)定8次，分別計(jì)算不同濃度樣本的平均值及sd值。
批內(nèi)差：cv<10%
批間差：cv<12%
皮質(zhì)醇elisa試劑盒穩(wěn)定性：
經(jīng)測(cè)定，試劑盒在有效期內(nèi)按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。
為減小外部因素對(duì)試劑金破壞前后檢測(cè)值的影響，實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境條件需盡量保持一致，尤其是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實(shí)驗(yàn)員來進(jìn)行操作可減少人為誤差。
常用**方法
天津網(wǎng)絡(luò)醫(yī)院健康小屋
移動(dòng)排澇泵車自吸能力強(qiáng)、耐干轉(zhuǎn)、流量范圍大
【軸承】通過提升油封密封性，改善鋼鐵軋機(jī)驅(qū)動(dòng)軸性能
SF6密度繼電器校驗(yàn)儀主要功能及特點(diǎn)
操作步驟丨皮質(zhì)醇ELISA試劑盒簡(jiǎn)單精準(zhǔn)定量
自動(dòng)駕駛汽車量產(chǎn)：“共享出行”或成商用爆點(diǎn)
班產(chǎn)2萬塊至20萬塊油炸方便面加工生產(chǎn)線設(shè)備在選型時(shí)注意的事項(xiàng)
德國buehler SM-6型流量計(jì)五個(gè)使用注意事項(xiàng)
輸液器導(dǎo)管流量測(cè)試儀/品質(zhì)可靠
暗桿楔式閘閥的閥板脫落預(yù)防和應(yīng)急修復(fù)
hiraceramics研磨分散用氧化鋁球產(chǎn)品特性分析
二氧化碳激光打標(biāo)機(jī)在使用過程中應(yīng)該注意什么
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要環(huán)境，還是要發(fā)展？從環(huán)保角度看中國企業(yè)發(fā)展
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行標(biāo)《綜合交通運(yùn)行監(jiān)測(cè)客運(yùn)信息數(shù)據(jù)交換》發(fā)布
漿液循環(huán)泵積漿液處理是什么樣的呢？