細胞培養板的選擇和使用!
一、細胞培養板
細胞培養板作為培養細胞的一種常用和重要的工具,形狀、規格、用途多樣。
你是否也為如何選擇適合的培養板而迷茫?
你是否正為如何方便、正確使用培養板而苦惱?
你對如何處理培養板是否也有困惑?
對不同的培養板各有什么妙用你又有何體會?
二、細胞培養板的選擇
1)細胞培養板依底部形狀的不同可分為平底和圓底(u型和v型);
2)培養孔的孔數有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;
3)根據材質的不同有terasaki板和普通細胞培養板。具體選擇時根據培養細胞的類型、所需培養體積及不同的實驗目的而定。
三、平底和圓底(u型和v型)培養板的區別和選擇
1)貼壁細胞一般用平底培養板。
2)懸浮型細胞的培養一般用v型。
3)u型培養板亦多用于培養懸浮型細胞 。
4)v型培養板有時用做免疫學血凝集的實驗。
四、不同型狀的板子自然有不同用途
平底的什么類型的細胞都可用,但當細胞數目較少,如做克隆時,就用96孔平底板。
另外,做mtt等實驗時,無論貼壁和懸浮細胞,一般均用平底板。
至于u或v型板,一般在某些特殊要求時才使用。如在免疫學方面,當做兩種不同淋巴細胞混合培養時,需要二者相互接觸以刺激。因此,一般需要u型板﹐因細胞會由于重力的作用而聚集在一個很小的范圍內,v型板的用途更少,一般用于細胞殺傷實驗時,為了使效靶細胞緊密接觸﹐常使用v型板﹐但這種實驗也可用u型板替代(加入細胞后﹐低速離心)。
如果是養細胞的話, 通常是運用平底的, 另外要特別注意材質, 標示tissue culture (tc) treated就是養細胞用的。
圓底的通常是拿來做分析, 化學反應, 或是保存樣品用。因為圓底比較好將液體吸得干凈, 如果用平底的就不好吸了。 不過, 如果你是要測吸光值的話, 一定要買平底的才行。
大部分細胞培養都用平底培養板,便于鏡下觀測、有明確的底面積、細胞培養液面高度相對一致,還便于mtt檢測。
圓底培養板主要用于同位素摻入的實驗,需要用細胞收集儀收集細胞的培養,如“混合淋巴細胞培養”等。
如下是個用酶標板檢測冠狀病毒igm/igg抗體例子
(一)操作步驟
⒈加樣品:將標本稀釋液100ul(或2滴)加到包被板內(預留陰陽性及空白對照2-5孔),將待檢血清用pbs或生理鹽水按1:20稀釋后取10ul加入反應孔內。
⒉加對照:加入陰性對照1-3孔,陽性對照1孔,各100ul對照血清。空白對照1孔空置。
⒊溫育:將反應板震蕩使樣品混勻后,置37℃溫箱或水浴反應20分鐘。
⒋洗板:用蒸餾水將濃縮洗滌液15ml稀釋至300ml。(1)手洗:將反應板孔內容物傾出,將洗滌液注滿反應孔,放置30秒鐘后用力甩去,如此重復5次后拍干。(2)機洗:5次,每孔注入洗滌液200ul或注滿,停留30秒鐘后吸盡拍干。
⒌加酶標工作液:每孔加入100ul(或2滴)酶標工作液,置37℃溫箱反應20分鐘后,洗板5次,洗板操作同步驟4。
⒍顯色和終止反應:將底物a、b液各50ul(或1滴)加到反應孔內,37℃避光顯色10分鐘。每孔加入終止液50ul(或1滴)混勻終止反應。
(二)結果判定
⒈酶標儀設定波長450nm,先用空白調零,然后測定各孔od值;如果選用雙波長測定,不必設置空白對照孔。
⒉當陰性對照平均od值小于0.08,陽性對照(pc)od值大于0.30時,說明試劑盒有效且實驗操作正確,否則應當重復試驗。
⒊臨界值(cut—off value)=0.15+陰性對照平均(nc)od值(當陰性平均od值小于0.05時,按0.05計算;當陰性平均od值大于或等于等于0.05時按實際值計算)。
⒋標本od值≤臨界值為陰性,標本od值>臨界值為陽性。
常用不同培養板的孔底面積及*加液量:不同孔板所加培養液的液面都不宜太深,一般在2-3mm范圍,結合不同孔的底面積就可算出各培養孔的適宜加液量。若加液量過多會影響氣體(氧氣)交換,而且在搬動過程中易溢出造成污染。具體所加細胞密度依實驗的目的不同靈活掌握。
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