酶標儀的使用方法及注意事項
酶標儀即酶聯(lián)免疫檢測儀是酶聯(lián)免疫吸附試驗的儀器又稱微孔板檢測器。可簡單地分為半自動和全自動2大類，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個比色計,即用比色法來進行分析。盡管酶標儀的發(fā)展極為快速，種類繁多，功能也不斷加強，但其zui根本的功用是不變的，即比色測定。以下是酶標儀的使用方法以及在使用中的注意事項：
酶標儀的使用方法
一、測定波長
目前國內(nèi)常見的elisa試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶(hrp)，底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(tmb)和鄰苯二胺(opd)，其在*的存在下，經(jīng)hrp作用，分別氧化為2,2,-二氨基偶氮苯(dab)和聯(lián)苯醌。當ph值為5.0左右時，dab在450nm波長處有zui大吸收，當ph值降為l0時，zui大吸收波長移至492nm,同時摩爾消光系數(shù)變大，顯色加深，因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)。tmb的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長450nm處有zui大消光系數(shù)，如果hrp量少，h:o:和tmb過量時，則形成藍色的陽離子根。降低ph,即可使藍色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌，使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min。因此，450nm和492nm兩個波長是目前elisa測定zui常用的。
酶標儀有單波長和雙波長檢測功能有時使用者不知在什么情況下使用單或雙波長檢測。所謂的“單波長”就是使用一種對顯色具zui大吸收的波長即450nm或492nm進行比色測定；而“雙波長”則除了用對顯色具zui大吸收的波長即450nm或492nm進行比色測定外，同時用對特異顯色不敏感的波長如630nm進行測定，酶標儀zui后打印出來的吸光度則為二者之差。630nm波長下得到的吸光度是非特異的，來自于板子上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此，在elisa比色測定中，使用雙波長，且不必設(shè)空白孔。
二、測定的吸光度范圍
通常，酶標儀的吸光度測定范圍在。0-2.5之間即可以滿足elisa的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0-2.5之間，但現(xiàn)在基本上都做了拓寬，可達到3.5以上，并且能保持很好的精密度與線性。
三、光學(xué)系統(tǒng)
酶標儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道，亦有單通道)檢測，一般為硅光管或光導(dǎo)纖維，除測定通道外，有的酶標儀還有一個參比通道，每次測定可進行自我校準。酶標儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何，均可通過酶標儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和準確度等體現(xiàn)出來。光學(xué)系統(tǒng)好的話，則上述指標也應(yīng)較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。
四、檢測速度
酶標儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時間。檢測速度快，有利于提高檢測的精密度，即避免由于測定過程中，因測定時間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。
五、震板功能
酶標儀的震板功能是指酶標儀在對elisa板孔進行比色測定前對其進行振蕩混勻，使板孔內(nèi)顏色均一。目前市場上常見的酶標儀均有震板功能，所不同的是震板方式，有的可按上下、左右或旋轉(zhuǎn)等方式及振蕩幅度等任意調(diào)節(jié)。使用有震板功能的酶標儀，在進行elisa測定顯色反應(yīng)完成加入終止劑后，可不必振蕩混勻，直接放人酶標儀上測定即可。
六、溫育功能
溫育功能是指酶標儀本身能按要求自動地控制儀器內(nèi)部的溫度，使得elisa測定中微孔板條的溫育過程可在儀器內(nèi)部完成，而無需再外配溫箱。目前，只有少部分酶標儀具有此種功能。
七、軟件功能
軟件功能是指酶標儀所具有的對elisa定性和定量測定及其他測定方式如酶標動力學(xué)、紫外和凝集等數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析并報告結(jié)果的功能。軟件功能是中酶標儀的一個非常重要的功能。如果硬件方面區(qū)別不大，則軟件就成為判定酶標儀優(yōu)劣的惟一指標。對于用戶來說，好的軟件功能，對實際工作會有較大的幫助。elisa定性測定，酶標儀如具有陽性判斷值(cut-off)及其測定“灰區(qū)”(即指測定吸光度處于cut-off周圍的一定區(qū)域，此區(qū)域內(nèi)結(jié)果應(yīng)為“可疑”)的統(tǒng)計計算功能，不但方便了實驗室工作人員，而且在某些特定的情況下，有很高的實用價值。有研究表明，四參數(shù)方程能較好地反映免疫測定的劑量反應(yīng)曲線，zui為適合于定量酶免疫測定的曲線擬合。因此，如目的是定量測定，則在酶標儀的軟件功能中，要有這種曲線回歸方程計算分析功能。其他諸如連點、直線等回歸計算，則可根據(jù)酶標儀的應(yīng)用目的而定，如兼用于微量生化測定，則此類回歸計算就很有必要。
八、語言界面
通常進口的中酶標儀人機對話多采用英文。這對于某些基層實驗室可能會存在語言方面的困難，從而難以zui大限度地發(fā)揮酶標儀的作用。為解決這方面的問題，已有一些酶標儀采用了中文界面。這樣就大大方便了廣大基層實驗室技術(shù)人員的使用。
酶標儀的使用注意事項
1、工作環(huán)境
酶標儀是一種精密的光學(xué)儀器，因此良好的工作環(huán)境不僅能確保其準確性和穩(wěn)定性，還能夠延長其使用壽命。根據(jù)dinvde0871條例，儀器應(yīng)放置在無磁場和干擾電壓的位置。依據(jù)din45635-19條例：
儀器應(yīng)放置在低于40分貝的環(huán)境下。
為延緩光學(xué)部件的老化，應(yīng)避免陽光直射。
操作時環(huán)境溫度應(yīng)在15℃-40℃之間，環(huán)境濕度在15%-85%之間。
操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定。
操作環(huán)境空氣清潔，避免水汽，煙塵。
保持干燥、干凈、水平的工作臺面，以及足夠的操作空間。
2、操作注意事項
酶標儀的功能是用來讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果，因此要得到準確結(jié)果，試劑盒的使用必須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標儀之前是通過目測判斷結(jié)果，操作過程隨意性較大，在使用酶標儀后如果不能及時糾正操作習(xí)慣，會造成較大誤差。在酶標儀的操作中應(yīng)注意以下事項：
使用加液器加液，加液頭不能混用。
洗板要洗干凈。如果條件允許，使用洗板機洗板，避免交叉污染。
嚴格按照試劑盒的說明書操作，反應(yīng)時間準確。
在測量過程中，請勿碰酶標板，以防酶標板傳送時擠傷操作人員的手。
請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部，操作完成后請洗手。
如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害，請嚴格按照試
劑盒的操作說明，以防對操作人員造成損害。
如果儀器接觸過污染性或傳染性物品，請進行清洗和消毒。
不要在測量過程中關(guān)閉電源。
對于因試劑盒問題造成的測量結(jié)果的偏差，應(yīng)根據(jù)實際情況及時修改參數(shù)，以達到*效果。
使用后蓋好防塵罩。
出現(xiàn)技術(shù)故障時應(yīng)及時與廠家，切勿擅自拆卸酶標儀。
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新建透平油濾油機濾芯的廣泛應(yīng)用及技術(shù)參數(shù)
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微型扭轉(zhuǎn)試驗機摩信*
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你知道復(fù)合加工中心在航空零件制造中的應(yīng)用么
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目前國內(nèi)常見的elisa試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶(hrp)，底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(tmb)和鄰苯二胺(opd)，其在*的存在下，經(jīng)hrp作用，分別氧化為2,2,-二氨基偶氮苯(dab)和聯(lián)苯醌。當ph值為5.0左右時，dab在450nm波長處有zui大吸收，當ph值降為l0時，zui大吸收波長移至492nm,同時摩爾消光系數(shù)變大，顯色加深，因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)。tmb的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長450nm處有zui大消光系數(shù)，如果hrp量少，h:o:和tmb過量時，則形成藍色的陽離子根。降低ph,即可使藍色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌，使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min。因此，450nm和492nm兩個波長是目前elisa測定zui常用的。
酶標儀有單波長和雙波長檢測功能有時使用者不知在什么情況下使用單或雙波長檢測。所謂的“單波長”就是使用一種對顯色具zui大吸收的波長即450nm或492nm進行比色測定；而“雙波長”則除了用對顯色具zui大吸收的波長即450nm或492nm進行比色測定外，同時用對特異顯色不敏感的波長如630nm進行測定，酶標儀zui后打印出來的吸光度則為二者之差。630nm波長下得到的吸光度是非特異的，來自于板子上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此，在elisa比色測定中，使用雙波長，且不必設(shè)空白孔。
二、測定的吸光度范圍
通常，酶標儀的吸光度測定范圍在。0-2.5之間即可以滿足elisa的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0-2.5之間，但現(xiàn)在基本上都做了拓寬，可達到3.5以上，并且能保持很好的精密度與線性。
三、光學(xué)系統(tǒng)
酶標儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道，亦有單通道)檢測，一般為硅光管或光導(dǎo)纖維，除測定通道外，有的酶標儀還有一個參比通道，每次測定可進行自我校準。酶標儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何，均可通過酶標儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和準確度等體現(xiàn)出來。光學(xué)系統(tǒng)好的話，則上述指標也應(yīng)較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。
四、檢測速度
酶標儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時間。檢測速度快，有利于提高檢測的精密度，即避免由于測定過程中，因測定時間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。
五、震板功能
酶標儀的震板功能是指酶標儀在對elisa板孔進行比色測定前對其進行振蕩混勻，使板孔內(nèi)顏色均一。目前市場上常見的酶標儀均有震板功能，所不同的是震板方式，有的可按上下、左右或旋轉(zhuǎn)等方式及振蕩幅度等任意調(diào)節(jié)。使用有震板功能的酶標儀，在進行elisa測定顯色反應(yīng)完成加入終止劑后，可不必振蕩混勻，直接放人酶標儀上測定即可。
六、溫育功能
溫育功能是指酶標儀本身能按要求自動地控制儀器內(nèi)部的溫度，使得elisa測定中微孔板條的溫育過程可在儀器內(nèi)部完成，而無需再外配溫箱。目前，只有少部分酶標儀具有此種功能。
七、軟件功能
軟件功能是指酶標儀所具有的對elisa定性和定量測定及其他測定方式如酶標動力學(xué)、紫外和凝集等數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析并報告結(jié)果的功能。軟件功能是中酶標儀的一個非常重要的功能。如果硬件方面區(qū)別不大，則軟件就成為判定酶標儀優(yōu)劣的惟一指標。對于用戶來說，好的軟件功能，對實際工作會有較大的幫助。elisa定性測定，酶標儀如具有陽性判斷值(cut-off)及其測定“灰區(qū)”(即指測定吸光度處于cut-off周圍的一定區(qū)域，此區(qū)域內(nèi)結(jié)果應(yīng)為“可疑”)的統(tǒng)計計算功能，不但方便了實驗室工作人員，而且在某些特定的情況下，有很高的實用價值。有研究表明，四參數(shù)方程能較好地反映免疫測定的劑量反應(yīng)曲線，zui為適合于定量酶免疫測定的曲線擬合。因此，如目的是定量測定，則在酶標儀的軟件功能中，要有這種曲線回歸方程計算分析功能。其他諸如連點、直線等回歸計算，則可根據(jù)酶標儀的應(yīng)用目的而定，如兼用于微量生化測定，則此類回歸計算就很有必要。
八、語言界面
通常進口的中酶標儀人機對話多采用英文。這對于某些基層實驗室可能會存在語言方面的困難，從而難以zui大限度地發(fā)揮酶標儀的作用。為解決這方面的問題，已有一些酶標儀采用了中文界面。這樣就大大方便了廣大基層實驗室技術(shù)人員的使用。
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1、工作環(huán)境
酶標儀是一種精密的光學(xué)儀器，因此良好的工作環(huán)境不僅能確保其準確性和穩(wěn)定性，還能夠延長其使用壽命。根據(jù)dinvde0871條例，儀器應(yīng)放置在無磁場和干擾電壓的位置。依據(jù)din45635-19條例：
儀器應(yīng)放置在低于40分貝的環(huán)境下。
為延緩光學(xué)部件的老化，應(yīng)避免陽光直射。
操作時環(huán)境溫度應(yīng)在15℃-40℃之間，環(huán)境濕度在15%-85%之間。
操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定。
操作環(huán)境空氣清潔，避免水汽，煙塵。
保持干燥、干凈、水平的工作臺面，以及足夠的操作空間。
2、操作注意事項
酶標儀的功能是用來讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果，因此要得到準確結(jié)果，試劑盒的使用必須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標儀之前是通過目測判斷結(jié)果，操作過程隨意性較大，在使用酶標儀后如果不能及時糾正操作習(xí)慣，會造成較大誤差。在酶標儀的操作中應(yīng)注意以下事項：
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洗板要洗干凈。如果條件允許，使用洗板機洗板，避免交叉污染。
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劑盒的操作說明，以防對操作人員造成損害。
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