pcr擴增儀又稱為pcr基因擴增儀、pcr核酸擴增儀、聚合酶鏈反應核酸擴增儀,是利用pcr(polymerase chain reaction,聚合酶鏈反應)技術對特定dna擴增的一種儀器設備,被廣泛運用于醫學、生物學實驗室中,例如用于判斷檢體中是否會表現某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復制以及親子鑒定等。
根據dna擴增的目的和檢測的標準,可以將pcr儀分為普通pcr儀,梯度pcr儀,原位pcr儀,實時熒光定量pcr儀四類。
1、普通pcr儀
一次pcr擴增只能運行一個特定退火溫度的pcr儀稱作傳統pcr儀,也叫普通pcr儀。如果要做不同的退火溫度需要多次運行。主要是用于簡單的、對目的基因退火溫度的擴增。該儀器主要應用于科學研究、教學、醫學臨床、檢驗檢疫等機構。
2、梯度pcr儀
一次性pcr擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度,通常有12種溫度梯度)的pcr儀稱作梯度pcr儀。因為被擴增的不同dna片段,其最適退火溫度是不同的,通過設置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性pcr擴增,就可以篩選出表達量高的最適退火溫度,進行有效的擴增。用于研究未知dna退火溫度的擴增,這樣節約成本的同時也節約了時間。梯度pcr儀在不設置梯度的情況下也可以做普通pcr擴增。主要應用于科研、教學機構。
3、原位pcr儀
用于從細胞內靶dna的定位分析的細胞內基因擴增儀稱作原位pcr儀。如病源基因在細胞的位置或目的基因在細胞內的作用位置等。是保持細胞或組織的完整性,使pcr反應體系滲透到組織和細胞中,在細胞的靶dna所在位置上進行基因擴增。不但可以檢測到靶dna,又能標出靶序列在細胞內的位置,對于在分子和細胞水平上研究疾病的發病機理和臨床過程及病理的轉變有重大的實用價值。主要應用于臨床、科研。
4、實時熒光定量pcr儀
在普通pcr儀的基礎上增加一個熒光信號采集系統和計算機分析處理系統的pcr儀稱作熒光定量pcr儀。其pcr擴增原理和普通pcr儀擴增原理相同,只是pcr擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結合擴增。擴增的結果通過熒光信號采集系統實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統得出量化的實時結果輸出。把這種pcr儀叫做實時熒光定量pcr儀(qpcr儀)。熒光定量pcr儀有單通道、雙通道和多通道。當只用一種熒光探針標記的時候,選用單通道,有多熒光標記的時候用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記的目的基因表達產物,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同目的基因片段的量。主要用于醫學臨床檢測、生物醫藥研發、食品行業、科研院校等機構。
根據dna擴增時升溫介質的不同可以將pcr儀分為:變溫鋁塊式pcr儀、水浴式pcr儀和變溫式流式pcr儀。
1、變溫鋁塊式pcr儀
熱源用電阻絲、導電熱膜、熱泵式珀爾帖半導體元件制作,讓帶有凹孔的鋁塊升溫,用自來水、制冷壓縮機或半導體降溫。優點:溫度傳導快,各管的擴增一致性好;反應管規格一致時無須外涂石蠟油;可用微電腦調節溫度轉換;儀器制冷部件可以在完成擴增后降溫至4℃,保存樣品過夜。缺點:管內反應液溫度比鋁塊顯示溫度滯后;須使用特制且與鋁塊凹孔形狀緊密吻合的薄壁耐熱反應管;變溫時難以快速克服鋁塊的熱容量;壓縮機制冷啟動慢、重量大、滯后時間長。
2、水浴式pcr儀
儀器本身有3個不同溫度的水浴,用機械裝置將帶有反應管的架子移位和升降溫度,使溫度循環。優點:水為傳熱介質,溫度易恒定,熱容量大;反應管形狀無特殊要求,溫度轉換較快擴增效果穩定;具有較高的運行效率,擴增產物特異性好。缺點:高溫浴不穩定,水面需用液體石蠟覆蓋;改變水浴溫度所需時間較長,不易實施復雜程序(如套式pcr)的操作,儀器體積較大;室溫影響溫度下限。
3、變溫式流式pcr儀
依據空氣流的動力學原理,以冷熱氣流為介質升降溫度。優點:變溫迅速,擴增效果好,適合于微量、快速pcr;反應器不受形狀限制,管外無需涂液體石蠟;測定管內液體溫度作為控溫依據,顯示溫度真實可靠;易于用微電腦設定復雜的變溫程序;易于制成重量較輕的便攜式儀器,適合外出作業。缺點:以室溫為溫度下限,低溫難控制,對空氣流的動力學要求較高,需精心設計才能使各管溫度均勻。
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